[发明专利]核酸的外泌体包装

权利要求书

1.一种用于产生包含基因沉默核酸、目标核酸或其前体的外泌体或外泌体-样囊泡的方法，所述方法包括：

-引入核酸构建体至外泌体-产生细胞中或在外泌体-产生细胞中表达核酸构建体，所述核酸构建体包含掺入前-miR-451结构模拟物中的基因沉默核酸、目标核酸或其前体；

- 用溶酶体或自噬抑制剂处理所述外泌体-产生细胞；

-从所述细胞产生外泌体或外泌体-样囊泡；和

-收集或富集所产生的外泌体或外泌体-样囊泡。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述前-miR-451结构模拟物包含具有平末端、5’突出端、3’突出端或5’和3’松散端且具有25-54个核苷酸(nt)总长的茎-环二级结构。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述前-miR-451结构模拟物包含具有4-8 nt总环长的茎-环二级结构。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述前-miR-451结构模拟物包含在所述茎中具有至少一个碱基对错配的茎-环二级结构。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述前-miR-451结构模拟物包含具有延伸至Ago2裂解位置或在Ago2裂解位置之前或在Ago2裂解位置之后的3’末端的茎-环二级结构，使得所述前-miR-451结构模拟物包括5’突出端部分和3’碱基-配对部分。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述前-miR-451结构模拟物包含包括3’部分在内的单链结构，其模拟成熟miR-451。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述前-miR-451结构模拟物的长度是22-35nt。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述细胞是胚胎干细胞(ESC)克隆H1或H9细胞、间充质干细胞(MSC)、具有低Ago2表达或活性水平的细胞、原代人间充质干细胞、原代小鼠巨噬细胞、人乳腺癌细胞系、小鼠或人神经元细胞系、小鼠星形胶质细胞系、小鼠小神经胶质细胞系、小鼠运动神经元细胞系、HeLa细胞、小鼠胚胎成纤维细胞、或小鼠树突细胞。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述基因沉默核酸是或来源于miRNA、shRNA、Crispr引导RNA或siRNA。

10.根据权利要求1或2所述的方法，其中将所述细胞在无血清培养基或外泌体-耗尽的血清培养基中培养，同时产生所述外泌体或外泌体-样囊泡。

11.根据权利要求2所述的方法，其中所述前-miR-451结构模拟物还具有40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51或52nt的总长。

12.根据权利要求8所述的方法，其中所述细胞是人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、小鼠或人神经元细胞系Neuro2a或SHSY、小鼠星形胶质细胞系C8Da或SIM、小鼠小神经胶质细胞系BV2、小鼠运动神经元细胞系NSC-34或MN-1、HeLa细胞、小鼠胚胎成纤维细胞、或小鼠树突细胞JAWS II。

13.包含掺入前-miR-451结构模拟物中的基因沉默核酸的核酸构建体用于包装所述基因沉默核酸至由外泌体-产生细胞产生的外泌体或外泌体-样囊泡中的用途，其中所述核酸构建体用于引入所述细胞中或在所述细胞中表达。