[发明专利]统计大肠型菌落的方法

说明书

本发明提供了一种统计存在于培养的乳制品中的产气大肠菌的方法。所述方法可包括形成一种混合物，所述混合物包含预定量的所述乳制品和预定体积的稀释剂；用所述混合物接种薄膜培养装置以形成水凝胶，所述水凝胶包含供大肠菌生长的营养培养基、有效浓度的乳糖和有效浓度的MOPS；在促进大肠菌生长的条件下培养已接种的所述薄膜培养装置；以及鉴定并对存在于已接种的所述培养装置中的产气菌落进行计数。

相关申请的交叉引用

本申请要求提交于2015年12月7日的美国临时专利申请62/263,932的优先权，该临时专利申请的公开内容全文以引用方式并入本文。

背景技术

大肠菌为一类多样化的代谢相关的微生物。该类别细菌由它们将乳糖(一种存在于奶中的二糖)发酵成包括二氧化碳气体在内的一组代谢副产物的能力来限定。因此，直接且准确地统计样品中大肠菌的能力取决于检测由细菌的分离菌落产气的能力。

薄膜培养装置取代传统的微生物统计技术而得到便利地使用，传统技术使用例如含有琼脂培养基的培养皿(Petri dishes)。此类薄膜培养装置的若干示例描述于授予Hansen等人的美国专利4,565,783和授予Mach等人的美国专利5,364,766中；它们均全文以引用方式并入本文。在Hansen等人报告的典型装置中，将含有胶凝剂和微生物生长营养物质的可溶于冷水的干燥的粉末涂敷在防水基材上。将表面涂敷有含指示染料和粉末状胶凝剂的丙烯酸酯粘合剂的透明可见的覆盖片附接到经涂敷的基材上。

当使用该装置时，预定量的含水样品通常被放置成接触经涂敷的基材并且覆盖片被放置在样品和基材上方。含水样品水合溶解干燥的粉末，随后形成凝胶培养基，其能够维持微生物生长。在生长期期间，粘附于覆盖片上的指示染料在存活微生物存在时发生反应，提供可检测到的响应，由此可见培养装置中长出的细菌菌落。

为了检测产气细菌(例如产生CO₂的大肠菌)，Hansen等人的装置构造优选引起生物成因气体被截留在邻近在基材和覆盖片之间的凝胶培养基中的产气菌落处。

发明内容

本公开一般涉及用于培养并统计属于大肠菌群的微生物的方法。此外，本公开涉及用于统计样品中的微生物的装置。具体地，本公开涉及在薄膜培养装置中检测并统计产气大肠菌的改善方法。

本公开提供统计存在于培养的乳制品中的产气大肠菌的方法。该方法可包括形成一种混合物，所述混合物包含预定量的乳制品和预定体积的稀释剂；用该混合物接种薄膜培养装置以形成水凝胶，所述水凝胶包含供大肠菌生长的营养培养基、有效浓度的乳糖和有效浓度的MOPS；在有利于大肠菌生长的条件下培养已接种的薄膜培养装置；以及鉴定并对存在于已接种的培养装置中的产气菌落进行计数。

在该方法的任何实施方案中，稀释剂可包含MOPS。在任何实施方案中，稀释剂中的MOPS的浓度可为≥20mM且≤50mM。

词语“优选的”和“优选地”指在某些情况下可提供某些有益效果的本发明实施方案。然而，在相同的情况下或其它情况下，其它实施方案也可为优选的。此外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其它实施方案是不可用的，且并非旨在将其它实施方案排除在本发明范围之外。

如本文所用，“一种(个)”、“所述(该)”、“至少一种(个)”以及“一种(个)或多种(个)”可互换使用。因此，例如，检测“一种”微生物的方法可被理解为意指该方法可检测“一种或多种”微生物。

术语“和/或”意指所列要素的一个或全部，或者所列要素的任意两个或更多个的组合。

另外，在本文中，通过端点表述的数值范围包含该范围内所含的所有数值(例如，1至5包含1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。