[发明专利]冻干粪便微生物群样品的方法

权利要求书

1.制备来自供者受试者的粪便微生物群冻干物的方法，其包括下列步骤：

A)将来自供者受试者的粪便微生物群样品与稀释剂相混合，所述稀释剂为盐水水溶液，其包含：(i)至少一种选自多元醇、二至五糖或其混合物的冷冻保护剂，和(ii)麦芽糖糊精，和

B)将在A)中获得的混合物在低于-50℃的温度下进行冷冻，然后将其冻干。

2.根据权利要求1的制备冻干物的方法，其特征在于，在步骤B)中，将在A)中获得的混合物在-70℃至-100℃的温度下进行冷冻，然后将其冻干。

3.根据权利要求1的制备冻干物的方法，其特征在于，所述稀释剂为盐水水溶液，其至少包含半乳糖-乳糖或海藻糖作为冷冻保护剂。

4.根据权利要求1的制备冻干物的方法，其特征在于，所述稀释剂为盐水水溶液，其至少包含麦芽糖糊精混合物，以相对于该溶液的总体积而言4至20％的量。

5.根据权利要求1的制备冻干物的方法，其特征在于，在所述盐水水溶液中冷冻保护剂的总量为相对于该溶液的总体积而言3至30重量％。

6.根据权利要求5的制备冻干物的方法，其特征在于，在所述盐水水溶液中冷冻保护剂的总量为相对于该溶液的总体积而言4至20重量％。

7.根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤A)包括下列步骤：

A1)任选地，制备通过冷冻-解冻而形成的碘克沙醇或5-(N-2,3-二羟基丙基乙酰氨基)-2,4,6-三碘-N,N'-双(2,3-二羟基丙基)间苯二甲酰胺的连续梯度，

A2)在厌氧生活条件下，将至少一种来自供者受试者的粪便微生物群样品与任选地包含碘克沙醇或5-(N-2,3-二羟基丙基乙酰氨基)-2,4,6-三碘-N,N'-双(2,3-二羟基丙基)间苯二甲酰胺的盐水缓冲液相混合，

A3)任选地，将在A2)中获得的混合物放置于在A1)中获得的梯度之下，

A4)将在A2)或A3)中获得的混合物进行在厌氧生活条件下以低的加速度的顺次离心，或者进行超离心，

A5)在厌氧生活条件下回收在步骤A4)结束时形成的细菌环或上清液，

A6)将在A5)中回收的细菌环或上清液与稀释剂相混合。

8.根据权利要求7的方法，其特征在于，所述方法包括在厌氧生活条件下的下列步骤作为步骤A6)：

a)将在A5)中获得的并重新悬浮在盐水缓冲液中的细菌环或在A5)中获得的上清液在20至30℃的温度下以3000至4000xg的加速度离心5至15分钟的时间，

b)回收在步骤a)结束时获得的粒状沉淀，并将其重新悬浮在盐水缓冲液中，然后在20至30℃的温度下以200至500xg的加速度离心5至15分钟的时间，

c)回收在步骤b)结束时获得的上清液，并将其重新悬浮在盐水缓冲液中，然后在20至30℃的温度下以3000至4000xg的加速度离心5至15分钟的时间，

d)回收在步骤c)结束时获得的粒状沉淀，和

e)将在d)中回收的粒状沉淀与稀释剂相混合。

9.根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤B)的冻干在下列条件下进行：

B1)将在A)中获得的混合物在低于-50℃的温度下进行冷冻，

B2)在大气压下，将在B1)中获得的经冷冻的混合物加载到预冷却至在-50℃和-30℃之间的温度的冷冻干燥器中，然后

B3)至少一个使在B2)中加载的混合物进行首次干燥的步骤，其包括降低压力直至在80和200μbar之间的值，然后通过应用0.2至0.5℃/分钟的加热速度来提高搁架的温度直至在-20℃和+25℃之间的值，然后

B4)使在B3)中获得的混合物进行二次干燥，其包括降低压力至低于或等于80μbar的值，和以0.1至0.3℃/分钟的加热速率升高搁架的温度至在+25℃和+35℃之间的值，并保持在那里8至15小时。