[发明专利]冻干粪便微生物群样品的方法

说明书

冻干粪便微生物群样品的方法。本发明涉及冻干来自供者受试者的粪便微生物群样品的方法，其包括下列步骤：A)将来自供者受试者的粪便微生物群样品与选自多元醇、二至五糖、麦芽糖糊精和其混合物的稀释剂相混合，和B)将在A)中获得的混合物在低于‑50℃，优选地‑70℃至‑100℃的温度下进行冷冻，然后将其冻干。

本发明涉及冻干粪便微生物群样品的方法。本发明还涉及所获得的冻干物在粪便微生物群移植中的用途，优选地为了治疗肠道生态失调，尤其是艰难梭菌(Clostridiumdifficile)感染。

人肠道微生物群是存在于人胃肠系统(胃、肠和结肠)中的微生物(细菌、酵母和真菌)的全体。目前，微生物多样性据估计为大约10³个构成了成年个体的占优势的肠道微生物群的细菌物种，其中具有10¹⁴个细菌的丰度，其代表了在每个个体中200,000至800,000个基因的占优势的细菌宏基因组(metagenome)，即为人基因组的基因数目的10至50倍。

肠道(在子宫中是无菌的)从生命的头几天起发生菌落移生，直至向独特的个体微生物群演变。每个人拥有就物种而言相对接近的细菌，但其微生物群的确切组成(物种、比例)在很大程度上(超过2/3的物种)是宿主所特异的。

因此，人肠道微生物群是一个非常多样化的、复杂的且特异于每个个体的生态系统。

对于个体的健康来说，必要的是维持稳定的微生物群，其同时能够在变化后回到其初始状态和对于侵袭具有抗性。维持微生物群的大的多样性有助于其稳定性。然而，某些病理学状况或治疗使微生物群失衡：例如，抗生素，以及具有炎症性组分的疾病，例如慢性炎症性肠病(CIBD)，可以限制肠道中微生物群的多样性。

抗生素治疗(或抗生素疗法)尤其导致微生物群的改变和其屏障功能的丧失，这可以有助于致病生物例如艰难梭菌的增殖。

艰难梭菌感染对于医院内腹泻负有责任；该细菌可以呈现出对于传统的抗生素疗法(广谱的，例如万古霉素或甲硝唑)的抗性。为了重建肠道微生物群，和对抗艰难梭菌类型的感染，并因此重建内环境稳定(即共生)，考虑并测试了粪便微生物群移植。它在于将来自健康供者受试者的粪便引入到受者患者的消化道中，以便使宿主的经改变的肠道微生物群重新平衡。该粪便微生物群移植通常是同种异体的(即从健康供者个体至患者)。对于艰难梭菌类型的感染所获得的结果是令人鼓舞的，并且某些患者已被成功地治疗(Tauxe等人,Lab Medicine,2015年冬,第46卷,第1期；或van Nood E,Speelman P,Nieuwdorp M,KellerJ.2014Faecal microbiota transplantation:facts and controversies.Curr OpinGastroenterol 30(1):34-9)。

但是，目前的移植方法是经验性的，并且没有采取任何特别的预防措施以最好地保存厌氧细菌(其是肠道微生物群的主要组分)的生存力。此外，粪便微生物群移植的功效是可变的，并且可能需要多于一种治疗。

因此，对于拥有使人安心的、有效的且易于获得的(尤其是以工业规模)粪便微生物群样品存在需要。此外，对于其中细菌的生存力得到保存并具有长的保存期的粪便微生物群样品存在需要。

本发明使得能够满足这些需要。

因此，本发明涉及制备来自供者受试者的粪便微生物群冻干物的方法，其包括下列步骤：

A)将来自供者受试者的粪便微生物群样品与选自多元醇、二至五糖、麦芽糖糊精和其混合物的稀释剂相混合，和

B)将在A)中获得的混合物在低于-50℃，优选地-70℃至-100℃的温度下进行冷冻，然后将其冻干。

在一个特别的实施方案中，所所述稀释剂为盐水水溶液，其包含：(i)至少一种选自多元醇、二至五糖或其混合物的冷冻保护剂，和(ii)麦芽糖糊精。