[发明专利]从血浆纯化蛋白质的方法

说明书

本发明提供产生包含一种或多种蛋白质(例如血浆蛋白)的制剂(例如血浆制剂或纤维蛋白原(Fg)耗尽制剂)的方法。本发明的方法可以用于获得一种或多种蛋白质(例如Fg，免疫球蛋白(Ig；例如IgG)，α‑1蛋白酶抑制剂(A1PI)，白蛋白，血浆酶原，凝血酶原复合物和/或其它血浆蛋白)的富集制剂。使用本发明的方法可从单一样品(例如全血或血浆样品)获得多种富集制剂。

发明背景

血浆含有对血液凝结途径不可或缺的许多蛋白质。在患有一种或多种这种凝结因子缺陷的患者中，血浆强化疗法可以是有效的方法。然而，灌输富含关键血浆蛋白的组合物在效率和功效方面优越。

免疫球蛋白G (IgG)是血浆中最常见的抗体同种型，其浓度为每升血浆约7克。IgG水平或IgG功能差的患者患有各种免疫缺陷相关疾病。这些患者通常受益于经由静脉内，或IV递送(即IVIG)的预防性或治疗性免疫球蛋白强化疗法，其已经成为这种情况的标准治疗。

临床感兴趣的另一种血浆蛋白是α-1蛋白酶抑制剂(A1PI，也称为α-1抗胰蛋白酶)。A1PI起阻止结构上关键的蛋白质如弹性蛋白的降解的作用，且A1PI的缺乏会导致疾病例如肺气肿的发展。患有A1PI缺陷的患者每周静脉内施用纯化的A1PI来治疗。

纤维蛋白原(Fg)是具有治疗意义的另一种血浆组分。需要Fg强化疗法以治疗和预防先天性和获得性Fg缺乏症的出血，即损害凝结途径的低纤维蛋白原血症。出于这个原因，Fg通常从供体血浆分离。由于高度追求大量纯化的血浆组分，高效地依次纯化各种所需组分的方法是合乎需要的。

用于静脉内强化疗法方案的血浆蛋白如IgG、A1PI和Fg通过血浆去除术从来自供体的全血浆纯化。目前的大规模纯化方法通常基于Cohn分级分离的陈旧技术，其伴随多个固有的缺点。这种方法通过有时逐渐增加冷血浆样品中乙醇的浓度并通过有时从根本上改变pH来产生几种沉淀级分。乙醇可能会破坏蛋白质结构，对基于Cohn分级分离的方法的效率造成内在限制。例如，来自经典Cohn分级分离方案的IgG产量低于总全血浆IgG的50%。本领域迫切需要大规模更有效地纯化多种血浆蛋白的方法。

此外，由于传统方法仅依赖于基于pH、乙醇浓度、温度、离子强度和蛋白质浓度的血浆蛋白的差异溶解度，它们在具有类似结构的蛋白质之间缺乏特异性。

为了克服这些限制，在该领域需要可扩展的(scalable)方法，其从单一来源的全血浆有效地产生各种血浆蛋白的富集组合物。

发明概述

本发明提供用于从单一血浆来源产生多种蛋白质的改进和可扩展的方法。在一个方面中，本发明的特点在于产生富含IgG的Fg耗尽制剂的方法，其包括以下步骤：使Fg耗尽血浆与结合IgG的亲和层析吸附剂接触以产生吸附的IgG和包含未吸附的蛋白质的溶液；将包含未吸附的蛋白质的溶液与所述吸附的IgG分离；和从所述吸附剂洗脱吸附的IgG以产生富含IgG的Fg耗尽制剂。

在一个实施方案中，亲和层析吸附剂结合到CH3结构域，例如人免疫球蛋白(例如IgG，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)的CH3结构域。

在一个实施方案中，所述方法进一步包括以下步骤：使富含IgG的Fg耗尽制剂通过一个或多个离子交换柱以将IgG与污染物分离；从离子交换柱回收IgG以产生富含IgG的纯化的Fg耗尽制剂，将富集IgG的Fg耗尽制剂渗滤以产生渗滤液，和将所述渗滤液消毒。在一个实施方案中，污染物的一部分结合所述柱。在另一个实施方案中，IgG的一部分结合所述柱。