[发明专利]靶核酸的等温环介导扩增(LAMP)的荧光检测的方法，寡核苷酸及其试剂盒

权利要求书

1.一种检测靶核酸序列的环介导等温扩增(LAMP)的方法，所述方法包括以下步骤：

i)使可能含有所述核酸靶序列的测试样品与具有链置换活性的DNA聚合酶和由以下组成的寡核苷酸的组接触：

a.第一外部引物F3和第二外部引物B3；

b.第一内部引物FIP和第二内部引物BIP，

其中FIP由3’核酸序列F2和5’核酸序列F1c组成，且BIP由3’核酸序列B2和5’核酸序列B1c组成，

其中F2与所述靶核酸序列的F2c区互补，且B2与所述靶核酸序列的B2c区互补，

其中F2c和B2c是位于所述靶核酸序列的相反链上的非重叠区域；

c.第一环引物LF和可选的第二环引物LB，其能够与所述靶核酸序列的各自的区域杂交，

其中如果存在，所述环引物LF或所述环引物LB在其5'-末端由至少一个受体荧光团标记；

d.一个核酸探针，其能够在标记的LF或LB环引物的5'的位置处与所述靶核酸序列杂交，使得当所述核酸探针与所述靶核酸序列杂交时，使所述核酸探针的3′-末端紧邻所述标记的LF或LB环引物的5'-末端，

其中所述核酸探针在其3'-末端用能够将激发能量转移到所述LF或LB环引物的至少一个受体荧光团的至少一个供体荧光团标记，并且其中在吸收供体荧光团激发能量时，所述受体荧光团的荧光发射的强度增加；以及

ii)检测作为所述靶核酸序列的LAMP扩增的指示的荧光参数的变化，其中所述荧光参数的变化是所述受体荧光团的荧光发射的强度的增加。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，当与所述靶核酸序列杂交时，所述核酸探针的所述3'-末端与所述标记的LF或LB环引物的所述5'-末端间隔不大于6个核苷酸，优选地不大于1个核苷酸，更优选0个核苷酸。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述标记的LF或LB环引物是茎环可延伸引物，包含i)能够选择性识别并杂交至所述靶核酸序列的各自的区域的中央环序列，和ii)彼此互补使得形成双链茎的5'末端序列和3'末端序列。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述靶核酸序列包含优选选自点突变、缺失、插入或易位的至少一个突变。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述靶核酸序列的扩增是所述至少一个突变的存在或不存在的指示。

6.一种用于检测靶核酸序列的环介导等温扩增(LAMP)的寡核苷酸的组，所述组由以下组成：

a.第一外部引物F3和第二外部引物B3；

b.第一内部引物FIP和第二内部引物BIP，

其中FIP由3'核酸序列F2和5'核酸序列F1c组成，且BIP由3'核酸序列B2和5'核酸序列B1c组成，

其中F2与所述靶核酸序列的F2c区互补，且B2与所述靶核酸序列的B2c区互补，

其中F2c和B2c是位于所述靶核酸序列的相反链上的非重叠区域；

c.第一环引物LF和可选的第二环引物LB，其能够与所述靶核酸序列的各自的区域杂交，

其中如果存在，所述LF环引物或所述LB环引物在其5'-末端由至少一个受体荧光团标记；

d.一个核酸探针，其能够在标记的LF或LB环引物的5'的位置处与所述靶核酸序列杂交，使得在所述核酸探针与所述靶核酸序列杂交时，所述核酸探针的3'-末端紧邻所述标记的LF或LB环引物的5'-末端，其中所述核酸探针在其3'-末端用能够将激发能量转移到所述LF或LB环引物的至少一个受体荧光团的至少一个供体荧光团标记，并且其中所述受体荧光团的荧光发射的强度在吸收供体荧光团激发能量时增加。