[发明专利]从血液样本中分离靶细胞的方法及其用途

说明书

提供了从血液样本中获得靶细胞的方法及其用途，该方法包括：(1)将血液样本进行免疫磁珠分选，以便获得含有该靶细胞的第一分选产物；(2)将该第一分选产物进行流式细胞分选，以便获得含有该靶细胞的第二分选产物；以及(3)采用口吸管法分离该第二分选产物，以便获得呈单细胞形式的该靶细胞。

优先权信息

无。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及从血液样本中分离靶细胞的方法及其用途。

背景技术

近年来，随着高通量测序技术的发展，利用高通量测序方法通过对孕妇外周血中胎儿游离DNA的检测来判断胎儿染色体数目的异常已经越来越得到广泛地认可。但是利用胎儿游离DNA有其自身的缺陷，首先母血中除了胎儿来源的游离DNA，还有存在大量母源DNA；同时，母血中胎儿游离DNA是片段化的，以不完整的基因组存在的，所以目前主要是针对于染色体数目异常的检测，对于特定基因位点的检测存在较大的困难。

因而，目前针对孕妇外周血中胎儿DNA检测的研究仍有待加强。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种能有效地从血液样本中分离具有完整基因组的靶细胞的手段，以用于孕妇外周血中胎儿全基因组的检测与分析。

需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

虽然目前已有文章和专利报道成功从母亲外周血中分离出胎儿细胞，但是此类分离出来的胎儿细胞在产前诊断的应用方面，主要是通过PCR和FISH等方法对胎儿性别进行鉴定，或者进行染色体数目异常的诊断，如21三体、13三体、18三体等。而此类分离出的胎儿细胞由于其具有的基因组并不完整，无法用于特定基因位点的检测(例如单基因疾病的检测)。

发明人经过仔细研究发现，目前的分离方法无法获得具有完整基因组的胎儿细胞的主要原因在于：1.缺乏特异性较高的抗体，导致靶细胞获取的准确度和纯度不高；2.由于胎儿细胞自身的脆弱性，使得即使组合多种分离方法得到高纯度的靶细胞，但在分离操作中对靶细胞产生的损伤使得最终获得的靶细胞无法含有完整的基因组。并且，分离步骤越多，损伤的概率越高，进而造成获得具有完整基因组的靶细胞的难度进一步加大。而目前的确尚无研究报道表明已获得高深度的从母血中分离出胎儿细胞的全基因组测序数据。

进而，发明人通过一系列研究，意外发现了一种能有效地从血液样本中分离出具有完整基因组的靶细胞的手段，进而可以有效地应用于孕妇外周血中胎儿全基因组的检测与分析。

因而，在本发明的第一方面，本发明提出了一种从血液样本中分离靶细胞的方法。根据本发明的实施例，所述靶细胞呈单细胞形式，所述方法包括：(1)将血液样本进行免疫磁珠分选，以便获得含有所述靶细胞的第一分选产物；(2)将所述第一分选产物进行流式细胞分选，以便获得含有所述靶细胞的第二分选产物；以及(3)采用口吸管法分离所述第二分选产物，以便获得呈单细胞形式的所述靶细胞。

利用该方法能够有效地从血液样本中分离获得具有完整基因组的靶细胞，并且所得到的靶细胞是单细胞形式的。另外，发明人意外地发现，通过本发明所得到的单细胞适于进行全基因组扩增，且扩增产物能够有效用于建库和测序，进而能够准确有效地获得单细胞的全基因组的序列信息(例如通过构建测序文库和全基因组测序)，进一步基于获得的靶细胞全基因组的序列信息，能够准确地确定所述胎儿的状态，例如：性别、亲缘关系、染色体异常、单核苷酸多态性、微缺失、微重复等，也即本发明所得到的单细胞能够有效地应用于孕妇外周血中胎儿全基因组的检测与分析。