[发明专利]新一代抗原-特异性TCR

权利要求书

1.一种产生人抗原-特异性T淋巴细胞的方法，包括以下步骤：

A)在抗原递呈细胞中表达至少一种融合蛋白，所述融合蛋白包含

-至少一种抗原或其片段，

-在所述抗原N-末端前端的内质网(ER)-易位信号序列，和

-在所述抗原C-末端后端的包含内体/溶酶体靶向序列的跨膜胞质结构域；和

B)在体外将包含T淋巴细胞的细胞群暴露于步骤A)的所述抗原递呈细胞，以激活对由所述抗原递呈细胞表达的抗原具有特异性的抗原-特异性T淋巴细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述融合蛋白包含至少两种抗原或其片段。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括以下步骤

C1)富集激活的和/或抗原-特异性的T淋巴细胞，其包括以下步骤：

(a)将包含激活的抗原-特异性T淋巴细胞的细胞群与结合分子或与递呈所需抗原的表位的MHC分子接触，所述结合分子与由激活的T淋巴细胞特异性表达的标志物蛋白特异性结合；

(b)分离与所述结合分子或所述递呈所需抗原的表位的MHC分子结合的T淋巴细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述由激活的T淋巴细胞特异性表达的标志物蛋白选自由Ox40、CD137、CD40L、PD-1、IL-2受体、干扰素γ、IL-2、GM-CSF和TNF-α所组成的组。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括以下步骤

C2)鉴定抗原-特异性T淋巴细胞，包括以下步骤：

a)将包含激活的抗原-特异性T淋巴细胞的细胞群的扩增细胞克隆与以下各项孵育

(i)如步骤A)中定义的抗原递呈细胞，和

(ii)对照抗原递呈细胞或不存在抗原递呈细胞；

b)比较每种细胞克隆与(i)和(ii)孵育的激活特征；

c)基于b)的所述比较，鉴定抗原-特异性细胞克隆；

其中，被(i)激活但不被(ii)激活表明所述细胞克隆是抗原-特异性的。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述ER易位信号序列来源于内体/溶酶体相关蛋白，并且其中所述内体/溶酶体相关蛋白选自包括LAMP1、LAMP2、DC-LAMP、CD68和CD1b的组，优选LAMP1。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含内体/溶酶体靶向序列的跨膜胞质结构域来源于LAMP1或DC-LAMP，优选DC-LAMP。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述ER易位信号序列源于人类并且其中所述包含内体/溶酶体靶向序列的跨膜胞质结构域源于人类。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗原递呈细胞包含抗原递呈细胞的不同群体，每个群体表达不同的抗原融合蛋白。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗原递呈细胞是通过包括以下步骤的方法产生的成熟树突细胞：

i)提供单核细胞；

ii)将步骤i)的单核细胞与IL-4和GM-CSF孵育；

iii)将步骤ii)的单核细胞与IL-4和GM-CSF及成熟混合物组合孵育，其中所述成熟混合物可选地包括IL-β、TNF-α、INF-γ、TLR7/8激动剂、PGE2和TLR3激动剂的组合。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中包含T淋巴细胞的细胞群是未经分离的外周血淋巴细胞的群体。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含T淋巴细胞的细胞群富含T淋巴细胞，优选CD8⁺和/或CD4⁺T淋巴细胞。