[发明专利]新一代抗原-特异性TCR

说明书

本发明涉及用于产生人抗原‑特异性T淋巴细胞的方法。该方法采用与抗原或其片段融合的MHC II类靶向信号以获得经过RNA编码的蛋白质的MHC类递呈。因此，本发明涉及包含MHC II类靶向信号和至少一种抗原或其片段的表达载体及其用于体外产生抗原‑特异性T淋巴细胞的用途。还描述了对肿瘤抗原或病毒抗原具有特异性的T细胞克隆和T细胞受体(TCR)。

技术领域

本发明涉及用于产生人抗原-特异性T淋巴细胞的方法。该方法采用与抗原或其片段融合的MHC II类靶向信号以获得经过RNA编码的蛋白质的MHC I类和II类递呈。因此，本发明涉及包含MHC II类靶向信号和至少一种抗原或其片段的表达载体及其用于体外产生抗原-特异性T淋巴细胞的用途。还描述了对肿瘤抗原或病毒抗原具有特异性的T细胞克隆和T细胞受体(TCR)。

背景技术

过继性T细胞转移采用基于T细胞的细胞毒性反应来控制慢性病毒感染和肿瘤。在体外产生对患者癌症具有天然反应性或基因工程化反应性的T细胞，然后将该T细胞转移返回至患者体内。已经将过继转移自体肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)用于成功治疗晚期肿瘤患者。TIL疗法在临床上的广泛应用的主要局限性在于肿瘤的免疫原性通常很差，以及从胸腺中选择消极T细胞的机制，该机制有效地去除具有自身抗原-特异性的T细胞。因此，在许多情况下，无论是对肿瘤特异性抗原具有较高亲和力的T细胞，还是具有所需特异性的T细胞，都不能将它们从患者血液或肿瘤切除物中分离出来。为此，转移以基因方式重新引导的外周血淋巴细胞(PBL)为克服这些限制提供了可能性。

此外，T淋巴细胞在癌症和慢性感染中丧失功能并耗尽。

在T细胞受体(TCR)基因疗法的帮助下，可以从患者血液中快速地产生数百万个肿瘤反应性T细胞。TCR基因疗法开创了灵活方法以将肿瘤特异性转移至可扩增且在功能上有希望的T细胞亚群。该方法包括将限定的抗原-特异性T细胞克隆的经分离的TCR基因转移至与人类白细胞抗原(HLA)匹配的供体的受体T淋巴细胞中，以使该受体T淋巴细胞具有所需的抗原-特异性。

对于癌症或病毒疾病，采用CD8⁺细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的过继性T细胞疗法是一种有希望的免疫疗法。为了增强临床反应，互补性转移CD4⁺辅助性T细胞为增强CD8⁺CTL反应提供了可能性。已知CD4⁺T淋巴细胞为CD8⁺CTL提供了关键性帮助，并且对长效CD8⁺记忆T细胞的产生具有关键作用。因此，快速且有效地分离和表征肿瘤抗原-特异性CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞是重要的。

许多肿瘤表达MHC II类分子，因此来自CD4⁺T细胞的TCR对攻击直接攻击这些肿瘤特别有用。

为了扩展采用过继性细胞疗法(ACT)来治疗患有生长更快的肿瘤或慢性病毒性疾病的患者的能力，目标是转移富集的肽特异性效应T细胞(CD4T辅助细胞和细胞毒性T淋巴细胞，这些细胞因其配体特异性而被选择)以有效地攻击病毒或肿瘤细胞，同时避免严重攻击正常组织。将这些细胞离体迅速地大量扩增，然后将其用于ACT。可替换地，采用受体外周血淋巴细胞或具有定义的特异性的激活的T细胞克隆(生长良好且没有攻击正常宿主组织的能力)，可以克隆这些配体特异性T细胞的T细胞受体(TCR)，并将它们作为TCR转基因在激活的淋巴细胞中表达。

因此，需要抗原-特异性TCR和分离这些TCR的有效方法。

发明内容

因此，本发明的目的是提供用于分离具有抗原-特异性TCR的T细胞的有效方法。提供用于产生CD4TCR和/或CD8TCR的方法将是期望的。此外，本发明的目的是提供TCR或其功能部分(如CDR3区)。实现对肿瘤抗原表现出较高和/或最佳亲和力的TCR将是有利的。

因此，本发明的第一方面涉及产生人抗原-特异性T淋巴细胞的方法，包括以下步骤：