[发明专利]用于生产酵母提取物的方法

权利要求书

1.一种用于生产酵母提取物的方法，该方法包括：

a)向包含蛋白质的酵母中添加酶组合物；和

b)进行孵育以便水解该蛋白质，

其中该酶组合物包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶，并且该第二蛋白酶选自由以下组成的组：

(i)多肽，该多肽包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQID NO:2的氨基酸1-177，或由其组成；

(ii)多肽，该多肽包含与本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177具有至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少91％，更优选至少92％，甚至更优选至少93％，最优选至少94％，并且甚至最优选至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或由其组成；

(iii)变体，该变体包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；和

(iv)具有蛋白酶活性的(i)、(ii)或(iii)的多肽的片段。

2.如权利要求1所述的方法，其中该第二蛋白酶衍生自嗜热子囊菌属(Thermoascus)，优选地衍生自嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)，并且最优选地衍生自嗜热子囊菌CGMCC编号0670。

3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该酵母是酵母属(Saccharomyces)、克鲁维酵母属(Kluveromyces)或假丝酵母属(Candida)，优选地该酵母是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该木瓜蛋白酶以0.0125mg-12.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.025mg-5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.125mg-2.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.25mg-1.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.5mg-1mg/g酵母干物质的量存在。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中基于该蛋白酶活性，该木瓜蛋白酶以30U-30000U/g酵母干物质的量存在、优选地以60U-12000U/g酵母干物质的量存在、优选地以300U-6000U/g酵母干物质的量存在、优选地以600U-3600U/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以1200U-2400U/g酵母干物质的量存在。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该第二蛋白酶以0.002mg-2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.004mg-0.4mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.02mg-0.2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.04mg-0.08mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中基于该蛋白酶活性，该第二蛋白酶以0.001-1FLPU-A/g酵母干物质的量存在、优选地以0.002-0.2FLPU-A/g酵母干物质的量存在、优选地以0.01-0.1FLPU-A/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.02-0.04FLPU-A/g酵母干物质的量存在。

8.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法进一步包括将酵母悬浮在水性溶液中。

9.如权利要求8所述的方法，该方法进一步包括将所述酵母悬浮液的pH调节至更碱性。

10.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法进一步包括在步骤b)之后进行离心以获得沉淀物和上清液，优选地其中在该上清液中回收该水解的蛋白质。