[发明专利]视网膜色素上皮细胞的制备

说明书

公开了产生视网膜色素上皮细胞的方法。还公开了包含该细胞的细胞群体及其用途。

技术领域

本发明在其一些实施方式中涉及从多能干细胞制备视网膜色素上皮细胞的方法。

背景技术

视网膜色素上皮(RPE)是位于神经视网膜和脉络膜毛细血管层之间的单层色素细胞。RPE细胞在视网膜及其光感受器的维持和功能方面发挥关键作用。这些包括血-视网膜屏障的形成、杂散光的吸收、营养物质向神经视网膜的供应、视觉色素的再生以及光感受器的脱落外节(shed outer segment)的摄取和再循环。

由于多种原因，视网膜组织可能退化。这些原因中有：动脉或静脉阻塞、糖尿病性视网膜病变和早产儿视网膜病变，其通常是非遗传性的。存在着遗传性疾病，如色素性视网膜炎、视网膜劈裂症、格子样变性、Best病、斯特格氏病，其也涉及视网膜组织变性。常见的视网膜变性病症是年龄相关性黄斑变性(AMD)。这些病症的特征在于渐进型的视网膜变性。

RPE细胞可以潜在地用于上述视网膜疾病中退化RPE的细胞替代疗法。它也可以用作用于引入基因以治疗视网膜变性疾病的媒介。这些细胞还可以用作视网膜变性疾病的体外模型、用作用于小分子治疗效果的高通量筛选的工具以及用于发现和测试用于视网膜变性疾病的新药的工具。RPE细胞也可用于RPE发育、成熟、特征、性质、代谢、免疫原性、功能和与其他细胞类型的相互作用的基础研究。

人胎儿和成人RPE已被用作同种异体移植的可选供体来源。然而，获得足够组织供应的实际问题以及涉及使用来自流产胎儿的组织的伦理顾虑限制了这些供体来源的广泛使用。鉴于供应成人和胎儿RPE移植物的这些限制，已经研究了替代供体来源的可能。人多能干细胞作为移植用RPE细胞的来源提供了显著的优势。它们的多能发育潜能可以使它们能够分化成真正的功能性RPE细胞，并且鉴于它们无限自我更新的潜力，它们可以用作RPE细胞的不受限的供体来源。事实上，已经证实，在视网膜下移植到由RPE功能障碍引起的Royal College of Surgeons(RCS)大鼠视网膜变性模型后，人胚胎干细胞(hESC)和人诱导多能干细胞(iPS)可以在体外分化为RPE细胞，减轻视网膜变性并保持视觉功能。因此，多能干细胞可以是用于RPE细胞生产的不受限的来源。

从多能干细胞获得RPE细胞的现有方案是劳动密集且耗时的，产生有限数量的色素细胞。需要以大到足够使其可用于临床环境的量生产RPE细胞的新方法。

背景技术包括WO 2013/114360、WO 2008/129554和WO2013/184809。

发明内容

根据本发明的一个方面，提供了产生视网膜色素上皮(RPE)细胞的方法，其包括：

(a)在包含分化剂的培养基中的粘附表面上培养未分化的人多能干细胞的细胞群体以获得分化细胞，其中所述细胞群体的至少50％的细胞是Oct4⁺TRA-1-60⁺；和

(b)在包含TGFβ超家族的一个或多个成员的培养基中的粘附表面上培养分化细胞，由此获得RPE细胞。

根据本发明的一个方面，提供了治疗有需要的受试者的视网膜疾病的方法，其包括：

(a)根据本文所述的方法产生RPE细胞；和

(b)在收获后将治疗有效量的RPE细胞移植到受试者的眼中，由此治疗疾病。

根据本发明的一个方面，提供了根据本文所述的方法产生的RPE细胞群体。

根据本发明的一个方面，提供了治疗有需要的受试者的视网膜疾病或病症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的RPE细胞，由此治疗视网膜疾病或病症。