[发明专利]SynP160，用于基因在视杆光感受器中特异性表达的启动子

说明书

本发明提供分离的核酸分子，其包含SEQ ID NO:1的核酸序列或与SEQ ID NO:1的所述序列具有至少80％同一性的至少300bp的核酸序列，或由SEQ ID NO:1的核酸序列或与SEQ ID NO:1的所述序列具有至少80％同一性的至少300bp的核酸序列组成，其中，当所述分离的核酸分子可操作地连接编码基因的核酸序列时，所述分离的核酸分子特异性地导致所述基因在视杆光感受器中的表达。

发明领域

本发明涉及导致基因在视杆光感受器细胞中特异性地表达的核酸序列。

发明背景

为了表达目的，通常将重组基因作为活性表达盒中的cDNA构建体，转染至靶细胞、细胞群或组织中，以允许异源基因转录。该DNA构建体被细胞转录机器识别，识别过程涉及许多反式作用转录因子(TF)在顺式调控元件的活性，所述顺式调控元件包括增强子、沉默子、绝缘子和启动子(在本文中总称为“启动子”)。

基因启动子涉及所有这些调控水平，通过整合DNA序列的影响、转录因子结合和表观遗传特征，作为基因转录中的决定子。它们决定例如由质粒载体编码的转基因表达的强度以及其中将要表达所述转基因的细胞类型。用于驱动哺乳动物细胞中的异源基因表达的最常见启动子是人和小鼠巨细胞病毒(CMV)主要立即早期启动子。它们给予强表达并且已经在几个细胞类型中证实是稳健的。其他病毒启动子，如SV40立即早期启动子和劳斯肉瘤病毒(RSV)长末端重复(LTR)启动子，也常常用于表达盒中。

替代病毒启动子，也可以使用细胞启动子。已知的启动子包括，来自编码高丰度转录的细胞转录物的管家基因的启动子，所述转录物如β-肌动蛋白、延伸因子-1α(EF-1α)或泛素。与病毒启动子相比，真核基因表达更复杂并且需要许多不同因子的精确协作。

涉及内源性调控元件用于转基因表达的一个方面是，稳定的mRNA的产生和表达可以在宿主细胞的天然环境中进行，因此所述宿主细胞中提供反式作用转录因子。由于真核基因的表达受顺式-和反式-作用调控元件的复杂机制控制，因此大部分细胞启动子缺乏广泛的功能表征。真核启动子的部分通常位于其转录的序列的紧上游并且作为转录起始点。核心启动子直接地围绕转录起始位点(TSS)，其足以被转录机制识别。近端启动子(proximal promoter)包括核心启动子上游的区域并含有TSS和转录调控需要的其他序列部分。转录因子通过结合启动子和增强子序列中的调控基序表现为序列特异性，并且由此激活染色质和组蛋白修饰酶，这改变核小体结构及其位置，最终允许转录的启动。功能性启动子的鉴别主要取决于相关上游或下游增强子元件的存在。

涉及内源性调控元件用于转基因表达的另一个关键方面是一些启动子可以以细胞特异性方式起作用并将导致转基因在特定类型的细胞中表达，或根据启动子，在特定细胞子集中表达。

因此，本发明的一个目的是获得适用于在哺乳动物细胞中以高表达水平和细胞类型特异性方式表达重组基因的新序列。这样的序列解决本领域对于视网膜细胞特异性启动子的需求，以研发用于神经退行性疾病、视力恢复、药物发现、肿瘤治疗和疾病诊断研究的系统。

发明概述

本发明人通过结合表观遗传学、生物信息学和神经科学，来发现在眼中时仅在视杆光感受器中驱动基因表达的启动子。

本发明序列的核酸序列为：