[发明专利]用于无免疫应答的人中的肺结核的皮肤测试

说明书

本发明公开了结核分枝杆菌抗原在用于以下方面的用途：在无免疫应答的人或共同感染有HIV的人中体内确定Mtb感染的存在，和制备用于在个体中稳健地评估Mtb感染的存在的用于皮肤测试的诊断试剂(皮肤测试试剂)，其中所述个体是在无免疫应答的人或共同感染有HIV的人。

技术领域

本发明涉及结核分枝杆菌抗原用于制备在结核分枝杆菌和HIV共同感染的人中具有改善的TB诊断性能的特异性皮肤测试组合物的用途。本发明提供了一种包含结核分枝杆菌(Mtb)抗原的组合物，其用于在无免疫应答的人或共同感染有HIV的人中体内诊断Mtb感染，其中试剂包含两种抗原ESAT6和CFP-10的混合物。

背景技术

TB/PPD的概述

自其在1908年由Robert Koch发现之后，结核菌素纯化的蛋白质衍生物(PPD)已经用作潜伏性Mtb感染的诊断测试。

使用潜伏性Mtb感染的诊断测试来指导预防性治疗，对TB疾病的后来的发展具有引人注目的效果。Mtb感染的人没有症状，并且需要更温和的治疗方案，而患有活动性TB疾病的患者具有严重疾病、高死亡率，并需要更长和更复杂的治疗。认为1/3的世界人口感染有Mtb，每年8百万人发展成活动性TB，其中130万人死亡。

当作为诊断测试应用时，将少量的0.1mL PPD注射在皮肤的上层，并且在后面的2-3天，可通过使用简单的直尺测量皮肤的硬结而确定阳性反应。PPD皮肤反应的免疫学背景是IV型迟发型超敏反应，一种主要由PPD特异性Thl T细胞介导的反应。

当如Mendel和Mantoux所述应用时，PPD自1955年以来已经得到世界卫生组织的认可，并且基于PPD的结核菌素皮肤测试(TST)仍然是最广泛使用的诊断测试之一，每年进行超过5000万测试。

PPD是来自结核分枝杆菌的复杂的培养物滤液，其除了脂质和碳水化合物之外还包含超过1000种蛋白质抗原。这使PPD被Mtb感染的个体广泛识别，并且它在皮肤中高免疫原性地驱动强的Th1T细胞反应。然而，PPD的未经加工和复杂的组成也是PPD TST的问题的原因。重要地，PPD中的多种抗原还由调节性T细胞、CD1限制性T细胞和Th2细胞识别，其可选择性地抑制IV型反应发生。此外，PPD中的多种抗原也由环境分枝杆菌和用于接种抵抗TB的卡介苗(BCG)表达，这使PPD测试具有非特异性。

HIV和无免疫应答的个体

对使用PPD TST的另一个主要挑战是其在无免疫应答的人中的不可靠性。特别是在人免疫缺陷病毒(HIV)感染的人中，PPD TST经常变为无反应的和假阴性的，或由于应用太低截断值其可转为假阳性。

HIV对PPD产生IV型皮肤反应的能力的影响的免疫学背景是复杂的，然而，确立了由HIV感染导致的CD4T细胞的选择性丢失是根本原因。因此，由丢失CD4T细胞导致的免疫缺陷既是导致由机会性传染性的病毒和细菌(HIV/AIDS的标志)引起的疾病的根本因素，也是无法对PPD TST做出反应的根本因素。

这种困境的后果可能是致命的。通常，HIV感染(或其他免疫缺陷)在PPD TST测试时没有被诊断出。因此，负责的医师通常具有对PPD TST结果的错误依赖。这种错误的安全感频繁地导致误诊和Mtb感染的适当治疗的缺乏，这导致后来活动性TB疾病的发展。实际上，Mtb感染的患有HIV/AIDS的患者每年具有10％的患TB的风险，并且TB是杀死大部分HIV/AIDS患者的疾病。

应对BCG的交叉反应性的挑战

如上所述，BCG与环境分枝杆菌的交叉反应性是对PPD TST的主要限制。交叉反应性危害特异性并且由于假阳性反应可能导致治疗过度。特异性问题可在某种程度上-但不是完全地-通过使TST的截断值从5mm增加至10mm或甚至15mm硬结来解决，然而增加截断值危害测试的灵敏度。