[发明专利]一种新型呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体的制备方法在审
| 申请号： | 201710000306.0 | 申请日： | 2017-01-02 |
| 公开（公告）号： | CN108265079A | 公开（公告）日： | 2018-07-10 |
| 发明（设计）人： | 王弋;刘昕 | 申请（专利权）人： | 刘昕 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/866;C12N15/81;C07K19/00;C07K16/10;A61K39/295;A61K39/155;A61P31/14 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510663 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 融合蛋白载体 呼吸道合胞体病毒 融合蛋白 中和抗体 研发 制备 制备方法和应用 生物技术领域 病原体疫苗 高免疫原性 半胱氨酸 基因载体 机体免疫 药物筛选 铰链区 丝氨酸 域连接 操控 构象 颈环 位点 应用 诱导 损伤 病毒 保证 | ||
1.一种新型呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体的制备方法，其特征在于，由如下方法制备得到：基因全合成法将G蛋白CX3C类似域天然的颈环loop结构域直接连接到pre-F蛋白的a4-a5区域铰链区。
2.根据权利要求1所述的呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体，其特征在于：G蛋白CX3C类似域的第三个半胱氨酸(第182位)突变为丝氨酸。
3.权利要求1或2所述的呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：S1.基因全合成得到RSV G蛋白核心区CX3C第182位为丝氨酸的RSVpreF-CX3C融合蛋白基因序列。S2.根据RSV preF-CX3C融合蛋白的全长基因序列插入骨架载体，得到表达RSV preF-CX3C融合蛋白表达质粒。
4.根据权利要求1所述的呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体，其特征在于：应用哺乳细胞、昆虫细胞-杆状病毒和酵母等表达系统进行表达。
5.根据权利要求3所述的所述的呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体制备方法，其特征在于：所属骨架载体根据寄主细胞类型选择相应的骨架载体。
6.根据权利要求3、5所述的所述的呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体制备方法，其特征在于：所属骨架载体为pFastBac、pcDNA3.1、pVIV02或pBudCE4.1载体等。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1为：根据RSV preF-CX3C基因全序列进行寄主密码子偏爱性优化后，合成得到RSV preF-CX3C融合蛋白。
8.根据权利要求1所述的所述的呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体制备方法，其特征在于，所述步骤步骤以下s1将权利要求1-3任一所述的或权利要求4-8所述任一制备方法制备的RSV preF-CX3C融合蛋白表达质粒，转染到293T细胞培养基中，筛选阳性克隆细胞。S2将上一步获得的RSV preF-CX3C融合蛋白293T表达细胞进行悬浮培养后，初步离心去除细胞碎片后，收集上清浓缩后，经过未纯化得到RSV preF-CX3C融合蛋白。S3将上述步骤2)中得到的RSV preF-CX3C融合蛋白上清经过经过镍琼脂糖凝胶和阴离子交换柱，收集纯度较高区段的纯化样品为RSV preF-CX3C抗原，即为新型呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白，可以为免疫样品。
9.权利要求1或2所述的新型呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白在制备抗人RSV病毒的疫苗或抗人RSV病毒药物中的应用。
10.权利要求1或2所述的新型呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白在制备疫苗、中和抗体或生物学报告示踪系统中的应用。
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