[发明专利]一种体外活化扩增人自然杀伤（NK）细胞的方法及其专用培养体系

说明书

本发明公开了一种体外活化扩增人自然杀伤(NK)细胞的方法及其专用培养体系。该培养体系包括细胞激活剂和NK细胞扩增培养基细胞激活剂用于NK细胞的活化，NK细胞扩增培养基用于NK细胞的扩增。该体外活化扩增人自然杀伤(NK)细胞的方法，是将单个核细胞作为起始细胞，将细胞激活剂加入培养容器中进行铺板，然后向培养容器接种用含自体血浆的NK细胞扩增培养基制成的单个核细胞悬液，常规条件下培养扩增，即可得到高纯度的人自然杀伤(NK)细胞。本发明人自然杀伤(NK)细胞的培养体系及体外活化扩增方法将在肿瘤免疫治疗、免疫细胞的基础研究等领域中发挥重要作用，具有应用前景。

技术领域

本发明属于细胞与组织培养领域中细胞的培养方法和培养体系，特别是涉及一种体外活化扩增人自然杀伤(NK)细胞的方法及其专用培养体系。

背景技术

自然杀伤细胞(natural killer cells，简称NK细胞)是指存在于外周血、骨髓、淋巴结及其它组织中的大颗粒淋巴细胞，其表面特征性分子为CD56，不表达CD3(T淋巴细胞的一种特异抗原)。

NK细胞具有独特的免疫调节能力和细胞毒功能，可在未经致敏(priorsensitization)情况下，快速清除恶变细胞和病毒感染细胞。同时，NK细胞对自身细胞不具备细胞毒作用，这主要是由于体内的正常细胞表达自身MHC-I类分子，可以与NK细胞表面的抑制性受体—杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-likereceptors，KIR)结合，从而抑制NK细胞活性，这种现象被称为自身脱靶理论(self-missinghypothesis)。然而，肿瘤细胞以及病毒感染后的细胞通常低表达或不表达MHC-I类分子，这些细胞接触NK细胞后不能抑制NK细胞杀伤活性，从而被活化的NK细胞杀灭。

NK细胞的细胞毒作用强大，一个NK细胞可以通过释放穿孔素和颗粒酶杀伤一个体积超过NK细胞数倍的肿瘤细胞。由于NK细胞具有强大的肿瘤细胞杀伤活性，人们一直认为NK细胞是免疫监视的重要细胞。2000年，柳叶刀(Lancet)杂志发表了一篇日本学者的文章，他们对3625位居民进行了11年随访，发现NK细胞活性越高癌症发生率越低，而且达到统计学显著差异(ImaiK,et al.Natural cytotoxic activity of peripheral-bloodlymphocytes and cancer incidence:an 11-year follow-up study of a generalpopulation.Lancet(2000)356:1795–9)。