[发明专利]一种氟西汀人工抗原的制备方法

说明书

本发明提供了一种氟西汀人工抗原的制备方法，是以氟西汀盐酸盐为原料，制得氟西汀的半抗原，再利用活泼酯法制备氟西汀人工抗原。本发明制备方法简单，产率高，容易工业化规模生产，制备的氟西汀人工免疫原可进行动物免疫，取得相应的多克隆抗体，与制备的氟西汀人工包被原一起，用于建立新型免疫分析方法，为氟西汀的检测提供更加方便快速准确的途径。

技术领域

本发明涉及人工制备技术领域，具体涉及一种氟西汀人工抗原的制备方法。

背景技术

氟西汀(FXT)是一种选择性的5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)，临床上广泛用于成人抑郁症、强迫症和神经性贪食症的治疗。近年来有研究表明，氟西汀具有治疗肥胖的作用，每日服用氟西汀40～80mg，8周后体重可下降2～6kg，其效果明显超过普通安慰剂。在对包括600多例肥胖患者的研究中发现，体重下降幅度主要取决于氟西汀的每日用量。因其减肥效果明显，在利益的驱动下，不法商贩随意加大减肥药中该成分剂量甚至在各类减肥保健食品中滥用极有可能。故此，对减肥药及减肥保健食品中开展氟西汀的快速监测，可有效的控制该药物的违法滥用，对维护人民的健康安全非常必要。

目前对于减肥保健食品中的氟西汀以及氟西汀的血药浓度检测主要采用气相色谱法和高效液相色谱法等，但是存在仪器昂贵，检测费时，操作繁琐，不便于普及等问题。近年来，免疫分析法其简单、廉价、快捷、灵敏度高、适用于大批量样品检测等优点而成为主要的初步帅选分析方法，它是利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质的分析方法，被广泛应用于农兽药残留分析、掺伪食品鉴定、血药浓度测定等领域。因此，有必要提供一种氟西汀人工抗原的制备方法，制备的人工抗原可用于免疫制备具有特异性的氟西汀抗体以及免疫检验试剂盒，进一步用于检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种氟西汀人工抗原的制备方法，制备方法简单。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种氟西汀人工抗原的制备方法，包括以下步骤：

1)氟西汀半抗原中间体制备：

称取3g氟西汀盐酸盐，溶于50mL双蒸水，用1mol/L NaOH调节溶液pH值至7.5(1mol/L NaOH)，用乙酸乙酯萃取溶液3次，合并萃取液，减压蒸出乙酸乙酯，向残留物中依次加入50mL无水甲醇和0.8g丙烯酸甲酯，回流搅拌反应12h，反应结束后，将溶剂减压转干，将产物用硅胶柱层析纯化，提取得到氟西汀半抗原中间体；

2)氟西汀半抗原制备：

称取1.5g氟西汀半抗原中间体，加入10％的NaOH溶液30mL，回流反应2h，然后用6mol/LHCl调节溶液的pH至5.0，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减压蒸干，得到氟西汀半抗原；

3)氟西汀人工抗原制备

采用活泼酯法，将氟西汀半抗原与载体蛋白进行偶联，制备氟西汀免疫抗原和包被抗原。

优选地，所述步骤3)的具体制备步骤如下：称取20mg氟西汀半抗原、10mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，加入到2mL N，N-二甲基甲酰胺中，磁力搅拌下，缓慢加入140mg N，N-二环己基碳二亚胺固体，遮光条件下搅拌反应8h，离心取上清液，在磁力搅拌下将上清液逐滴加入到8mL溶解有载体蛋白的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)中，室温下搅拌反应12h，在4℃下用磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)透析3d，分装，-20℃保存。

优选地，所述离心条件为5000rpm下离心5min。

优选地，所述载体蛋白为60mg牛血清蛋白或45mg卵血清蛋白。