[发明专利]一种奥贝胆酸及其制剂中有关物质的检测方法

说明书

本发明涉及一种奥贝胆酸及其制剂中有关物质的检测方法，属于药物分析检测领域。

背景技术

奥贝胆酸(obeticholic acid，OCA)，化学结构式如下：

化学名为：6α-ethyl-3α,7α-dihydroxy-5β-cholan-24-oic acid，属法尼醇X受体激动剂。2014年5月，美国FDA授予Intercept制药公司的奥贝胆酸快速审批通道认定。奥贝胆酸通过活化法尼醇X受体，间接抑制细胞色素7A1(CYP7A1)的基因表达。由于CYP7A1是胆酸生物合成的限速酶，因此奥贝胆酸可以抑制胆酸合成，用于治疗原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。

在过去的数年里，经实验结果表明，奥贝胆酸在原料合成、制剂生产和存放等过程中，都有可能引入残留原料及其他有关物质，在储存过程中还有可能产生一些降解产物。因此，要严格控制产品质量。

目前国内还未见有奥贝胆酸分析方法的文献报道，该药物也没有统一的药物标准，因此，为了更好地控制奥贝胆酸产品的质量，需要建立一套简单可靠并稳定有效的方法来进行本品的有关物质进行检测，解决合成工艺引入的或者降解及制剂加工过程产生的各类已知或未知杂质对产品纯度测定的干扰。

本发明采用普通的色谱柱(C18色谱柱)，检测波长240nm，柱温22℃，流速1.0ml/min，色谱条件的流动相由0.01mol/LNaH₂PO₄溶液(pH值＝3.8)-乙腈-甲醇组成，其配比为：25:35:40，等度洗脱方式，有效地对奥贝胆酸及其相关制剂进行含量和有关物质检测，可快速准确的检测出奥贝胆酸的杂质及其降解产物，操作简介，灵敏度高，可较好地控制产品质量。实现了奥贝胆酸有关物质的测定，保证了奥贝胆酸的质量控制，在合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种奥贝胆酸及其制剂中有关物质的检测方法。

本发明有关物质检测方法的实现包括以下步骤：

(1)色谱条件：普通C18柱，检测器采用二极管阵列检测器，柱温22℃，流速1.0ml/min，色谱条件的流动相由0.01mol/L NaH₂PO₄溶液-乙腈-甲醇组成，其配比为：25:35:40。理论踏板上按奥贝胆酸峰计算不低于3000。

(2)供试品溶液的配置；

取奥贝胆酸或其制剂、中间体和各个杂质适量，加流动相配置成0.2mg/ml的溶液，作为供试品溶液。

(3)对照品溶液的制备：

量取(2)供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含2ug的溶液，作为对照溶液。

(4)测定方法：

取对照溶液10ul，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的10％，再取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图至奥贝胆酸保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积。

本发明上述(2)中供试品溶液的制备：取奥贝胆酸对照品适量，用流动相配置成浓度为每1ml含0.2mg的溶液，再分别用流动相稀释成一系列不同浓度的溶液，分别进样10μl，使之产生主峰为基线噪音三倍的信号。经试验，最小检知量为0.2ng(S/N≥3)，若以有关物质检查时的浓度0.2mg.ml计算，期检出限度为0.1％。

本发明上述(3)中对照品溶液的指标：精密量取上述供试品溶液1ml，置100ml容量瓶中，加流动相溶剂并稀释至可得，作为对照溶液。当该对照溶液浓度范围在1～10μg/ml内时，峰面积与浓度呈良好的线性关系，其线性相关系数为0.9998(见附图1)。

本发明奥贝胆酸及其制剂中有关物质的检测方法，经多次试验证实，其有关物质检测的高效液相色谱图中，主峰及个杂质峰，峰形对称，分离效果好(R＞1.5)，适用于各种需要进行有关物质检测的奥贝胆酸及含奥贝胆酸的相关制剂，如奥贝胆酸片。

本发明与已有技术相比的积极效果在于：

1、本发明中液相色谱条件的优越性更强，适用于原料药及其各种剂型有关物质的检测，可快速准确的检测出奥贝胆酸的杂质和降解产物情况。在奥贝胆酸及其制剂的有关物质检测中，各峰形对称，分离度高，避免了出现前沿峰、个别峰分离度不够等问题。