[发明专利]用于扩增星头啄木鸟磁感应受体蛋白基因ISCA1片段的引物及其方法

说明书

本发明公开了一种用于扩增星头啄木鸟磁感应受体蛋白基因ISCA1片段的引物及其方法，所述引物包括第一引物对和巢式PCR引物，所述第一引物对包括序列号为SEQ ID NO.1的PIC‑2L‑F和序列号为SEQ ID NO.7的PIC‑2L‑R。所述方法包括如下步骤：(1)提取待测样品的总基因组DNA；(2)将总基因组DNA采用第一引物对进行PCR扩增；(3)步骤(2)扩增后的产物采用巢式PCR引物进行二次扩增；(4)对步骤(3)二次扩增后的产物进行检测。本发明可准确、简便、快速获取星头啄木鸟ISCA1基因的长片段序列。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于扩增星头啄木鸟磁感应受体蛋白基因 ISCA1片段的引物及其方法。

背景技术

许多生物都有利用地磁场来导航或迁徙的现象，如候鸟的迁徙，信鸽传递信息等。早在 1978年，SchuLten等提出的“自由基对理论”模型认为，磁受体很有可能来自一种名为隐花 色素(Cryptochrome，Cry)的蓝光受体蛋白，这个过程涉及电子在磁场下的量子化学反应， 并且需要视觉系统的参与。这个模型后来成为许多理论工作的雏形，由Ritz和Wiltschkos等 人逐步完善，而Cry蛋白几十年来也一直是唯一的磁受体蛋白候选者。直到2015年6月， Vidal-Gadea等确定了秀丽隐杆线虫用于定位的磁敏神经元。Vidal-Gadea等认为，当线虫钻入 土壤时，可根据地球的磁域进行定位，以至于来自世界不同地区的线虫种群，可根据自己的 地理位置迁移到不同角度的土壤中。这说明，Cry蛋白可能并不是唯一的磁受体候选者。2015 年11月，谢灿等鉴定出ISCA1(iron-suLfur cluster assembly 1)基因是另一个磁感应受体蛋 白基因，证明它编码的铁硫蛋白和隐花色素蛋白不仅在体外组成棒状复合物，在体内也是共 定位的，这两种蛋白组成的复合物的晶体在体外会根据磁场的方向而改变自己的朝向。ISCA1 基因编码一种铁硫蛋白，铁硫蛋白最早由美国科学家Helmut Beinert在1960年发现，并在其 后得到了广泛研究，包括它们的蛋白质组装过程、生理学功能以及由于蛋白质异常产生的疾 病等等，但是从来没有人把铁硫蛋白和生物感磁动物迁徙联系在一起。ISCA1作为编码磁感 应受体蛋白的基因尚待进一步深入研究。

鸟类是研究生物迁徙和导航的理想载体。据世界鸟类学家联合会(InternationalOrnithologists’Union)最新统计结果，世界现存鸟类10，660种，分属于40个目，238个科，2294个属。而目前已知的鸟类ISCA1基因的序列只有数十种，分散在各个目中，分子数据少，对于深入研究鸟类导航或迁徙的分子机制带来了很大的困难。

星头啄木鸟(Yungipicus canicapillus)，据世界鸟类学家联合会最新分类(IOC-6.4)属于鴷 形目(Piciformes)、啄木鸟科(Picidae)、Yungipicus属，本发明基于利用巢式PCR技术，通 过设计特异性引物组对星头啄木鸟ISCA1基因长片段进行扩增和测序，获得了星头啄木鸟磁 感应受体蛋白基因ISCA1的长片段序列，为深入研究鸟类导航或迁徙的分子机制积累分子数 据、夯实理论基础。本发明方法技术实用性强，重复性好，可以特异性扩增星头啄木鸟磁感 应受体蛋白基因ISCA1的长片段序列。

发明内容

根据以上现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提出一种用于扩增星头啄木鸟 磁感应受体蛋白基因ISCA1片段的引物及其方法，目的是利用特异性引物，快、准确的获得 行头啄木鸟ISCA1基因序列。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种用于扩增星头啄木鸟磁感应受体蛋白基因ISCA1片段的引物，所述引物包括第一引 物对和巢式PCR引物，所述第一引物对包括序列号为SEQ ID NO.1的PIC-2L-F和序列号为 SEQ ID NO.7的PIC-2L-R。