[发明专利]一种利用氯胺T标记OxLDL‑Ab的方法

权利要求书

1.一种利用氯胺T标记OxLDL-Ab的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)在反应容器中依次加入PBS缓冲液、NaI溶液并混合均匀后，再利用移液管向该混匀后的溶液中加入OxLDL-Ab溶液，加入时移液管下端要伸入至混合溶液液面内1～3mm处，加入OxLDL-Ab溶液后再次混合均匀；然后加入氯胺T，并于2～10秒内盖上瓶盖，反应1～5min；

所述PBS缓冲液为磷酸盐缓冲液；所述NaI为Na¹²⁵I、Na¹²³I或Na¹³¹I；所述氯胺T溶液的浓度为2～6mg/ml，PBS缓冲液的浓度为0.1～0.4mg/ml，pH值为7.0～7.8；OxLDL-Ab溶液与NaI溶液的用量比为30μg/28MBq～40μg/28MBq；

(2)在步骤(1)得到的反应产物中加入偏重亚硫酸钠Na₂S₂O₅溶液以使反应终止；其中Na₂S₂O₅溶液的浓度为2.5～6mg/ml；Na₂S₂O₅与氯胺T的摩尔比例为1.2～2.4；

(3)以PBS缓冲液为淋洗液淋洗PD-10柱，淋洗3～5个柱体积后，加入含有牛血清白蛋白的PBS缓冲液再次淋洗PD-10柱，然后加入PBS缓冲液淋洗至柱平衡；

(4)将步骤(2)得到的反应产物过步骤(3)中得到的平衡后的PD-10柱，该反应产物是利用移液管转移至PD-10柱上方且移液管不能接触柱壁及柱面，待反应产物完全渗入柱面后，立即加入PBS缓冲液淋洗，并收集淋洗液，该淋洗液即为最终的纯化后的反应产物；

所述PD-10柱为交联葡聚糖凝胶过滤色谱柱，流速为6～10cm/min。

2.根据权利要求1所述的一种利用氯胺T标记OxLDL-Ab的方法，其特征在于，步骤(1)中所述OxLDL-Ab为IgM型OxLDL-Ab，其分子量为900KDa，以五聚体存在，由二硫键连接。

3.根据权利要求1所述的一种利用氯胺T标记OxLDL-Ab的方法，其特征在于，步骤(1)所述氯胺T溶液的浓度为5mg/ml，PBS缓冲液的浓度为0.2mg/ml，pH值为7.3；OxLDL-Ab溶液与NaI溶液的用量比为30μg/28MBq；反应时间为1min。

4.根据权利要求1所述的一种利用氯胺T标记OxLDL-Ab的方法，其特征在于，步骤(2)中所述Na₂S₂O₅溶液的浓度为5mg/ml；Na₂S₂O₅与氯胺T摩尔比例为1.5。

5.根据权利要求1所述的一种利用氯胺T标记OxLDL-Ab的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的含有牛血清白蛋白的PBS缓冲液中，该缓冲液的PH为7.4，浓度为0.01mol/L；牛血清蛋白在PBS缓冲液中的体积比为1％～3％。

6.根据权利要求1所述的一种利用氯胺T标记OxLDL-Ab的方法，其特征在于，步骤(1)中所述NaI溶液为Na¹²³I溶液。

7.根据权利要求1所述的一种利用氯胺T标记OxLDL-Ab的方法，其特征在于，步骤(1)中反应温度为室温。