[发明专利]一种利用氯胺T标记OxLDL‑Ab的方法

说明书

技术领域

本发明属于药物标记技术领域，具体涉及一种利用氯胺T标记OxLDL-Ab的方法。

背景技术

OxLDL-Ab是一类以OxLDL作为抗原诱发自身机体免疫应答产生的抗体，针对不同位点的抗原决定簇产生的OxLDL-Ab也不同。目前学术界公认氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，OxLDL)在动脉粥样硬化的形成与发展过程中起关键作用，是动脉粥样硬化早期及全病程中最重要的标志物。

OxLDL-Ab与AS(动脉粥样化)的密切相关性也已得到公认，并已实现了生物样品中OxLDL-Ab等重要因子的体外准确定量检测。通常OxLDL-Ab为IgG型，分子量在几kDa到数十kDa不等(Da为道尔顿)，目前成都华神生物技术有限责任公司研发了一种新型的IgM型OxLDL-Ab抗体，其是一类全新的抗体，其分子量为900KDa，属于μ型免疫球蛋白，以五聚体存在，由二硫键连接，结构较稳定。该抗体特异性高，在动脉粥样硬化放射性免疫诊断和治疗方向有开发前途。

但是目前OxLDL-Ab尤其是IgM型OxLDL-Ab在体内的显像诊断方面仍缺乏特异性高、稳定性好的标记抗体用于显像诊断，也尚无动物活体成功进行AS显像的报道，对于放射性显像用于AS早期诊断还需要进行深入的研究。碘是医学上常用的放射性核素，碘标记物的性质比其它放射性金属核素标记物更接近前体的生化特性，且用一般晶体闪烁计数器就能获得较高效率，结果精确。刘子华等于2009年在《同位素》杂志上公开报道了名为《¹²⁵I标记氧化低密度脂蛋白抗体》的文章，文章中公开了利用Iodogen碘化法标记OxLDL-Ab的方法，该方法存在标记时间长(>8min)、稳定性差、重复率差等缺陷，因此急需研发一种用碘标记OxLDL-Ab的新方法。

发明内容

(一)发明目的

根据现有技术所存在的问题，本发明提供了一种标记率高、标记时间短、稳定性好、放射化学纯度高且易于标准化规范操作的用碘标记OxLDL-Ab的方法。

(二)技术方案

为了解决现有技术所存在的问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种利用氯胺T标记OxLDL-Ab的方法，该方法包括以下步骤：

(1)在反应容器中依次加入PBS缓冲液、NaI溶液并混合均匀后，再利用移液管向该混匀后的溶液中加入OxLDL-Ab溶液，加入时移液管下端要伸入至混合溶液液面内1～3mm处，再次混合均匀；然后加入氯胺T，并于2～10秒内盖上瓶盖，反应1～5min；

所述PBS缓冲液为磷酸盐缓冲液；所述NaI为Na¹²⁵I、Na¹²³I或Na¹³¹I；所述氯胺T溶液的浓度为2～6mg/ml，PBS缓冲液的浓度为0.1～0.4mg/ml，pH值为7.0～7.8；OxLDL-Ab溶液与NaI溶液的用量比为30μg/28MBq～40μg/28MBq；以分子量计算，氯胺T与OxLDL-Ab的用量比为3963.6：1。

(2)在步骤(1)得到的反应产物中加入偏重亚硫酸钠Na₂S₂O₅溶液以使反应终止；其中Na₂S₂O₅溶液的浓度为2.5～6mg/ml；Na₂S₂O₅与氯胺T的摩尔比例为1.2～2.4；

(3)以PBS缓冲液为淋洗液淋洗PD-10柱，淋洗3～5个柱体积后，加入含有牛血清白蛋白(BSA)的PBS缓冲液再次淋洗PD-10柱，然后加入PBS缓冲液淋洗至柱平衡；

(4)将步骤(2)得到的反应产物过步骤(3)中得到的平衡后的PD-10柱，该反应产物是利用移液管转移至PD-10柱上方且移液管不能接触柱壁及柱面，待反应产物完全渗入柱面后，立即加入PBS缓冲液淋洗，并收集淋洗液，该淋洗液即为最终的纯化后的反应产物；

所述PD-10柱为交联葡聚糖(sephandexG50)凝胶过滤色谱柱，流速为6～10cm/min；

优选地，步骤(1)中所述OxLDL-Ab为IgM型OxLDL-Ab，其分子量为900KDa，以五聚体存在，由二硫键连接。