[发明专利]一种电子束辐照联合酶法分离纯化高亲和钙的麦胚多肽的方法

权利要求书

1.一种电子束辐照联合酶法分离纯化高亲和钙的麦胚多肽的方法，其特征在于：以麦胚分离蛋白为原料，将麦胚分离蛋白配成弱碱性的悬浊液，该悬浊液经过电子束辐照后冷冻干燥备用，利用碱性蛋白酶水解麦胚分离蛋白，得到麦胚多肽混合物，混合物经过超滤、阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱以及RP-HPLC分离纯化得麦胚多肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述悬浊液的制备方法为：将麦胚分离蛋白与去离子水按照料液w/v比为10～40％混合均匀，添加碱液，形成pH为7.5～8.5的悬浊液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述电子束辐照的的方法为：悬浊液密封于透明、耐辐照的密封袋中，悬浊液的厚度控制在1～2cm，电子辐照剂量为1～10kGy，辐照条件为1.5～5.0MeV/20～40mA。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述碱性蛋白酶水解条件为：蛋白浓度为2～5％，酶解pH为8.0～8.5、温度50～60℃、酶与蛋白重量配比为1:50～1:100。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分离纯化的具体步骤为麦胚多肽首先利用超滤过程进行分离，截取<1kDa、1～3kDa、>3kDa的组分；收集钙螯合率最高的组分通过DEAE-FF 16/10阴离子交换色谱进行分离，洗脱液为浓度梯度为含有0～0.5M NaCI的Tris-HCl，流速为5mL/min，洗脱峰在214nm下进行测量；收集钙螯合率最高的组分通过Superdex Peptide 10/300凝胶过滤色谱进行分离，洗脱液为去离子水，流速为0.5mL/min，洗脱峰在214nm下进行测定；收集钙螯合率最高的组分通过RP-HPLC进行分离，分离条件是用5～30％乙睛溶液作为梯度洗脱液，流速为lmL/min，洗脱液自含体积比为5％乙睛和95％水的混合液开始，至体积比为30％乙睛和70％水的混合液结束，进行梯度洗脱，收集钙螯合率最高的组分。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述多肽的氨基酸序列为Phe-Val-Asp-Val-Thr。