[发明专利]基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法及应用

说明书

本发明公开了基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法及应用，该方法包括新疆紫草的供试品溶液及对照品溶液的制备、毛细管电泳分析，其中，毛细管电泳分析中的运行缓冲液包括15～35mmol·L^‑1的十二烷基硫酸钠。本发明新疆紫草的指纹图谱的方法，样品的前处理简单方便、电泳过程高效快捷、无污染，所得谱图特征峰多，稳定性高，可控性好，可以为新疆紫草的质量控制提供依据，并为区别新疆紫草和内蒙紫草及其他类型紫草提供了鉴别方法。

技术领域

本发明属于中药指纹图谱领域，具体地说，涉及基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法及应用。

背景技术

紫草是我国传统中药材，2015版《中华人民共和国药典》收载的紫草为紫草科植物新疆紫草Arnebia euchroma(Royle)Johnst.或内蒙紫草Arnebia guttata Bunge的干燥根。紫草味甘、咸，性寒，归心、肝经，具有清热凉血、活血解毒、透疹消斑的功能，用于血热毒盛，斑疹紫黑，麻疹不透，疮疡，湿疹，水火烫伤等的治疗，是中医临床常用的清热解毒、凉血止血药物。药理学研究表明紫草还具有杀菌抗炎、护肝、抗HIV、抗生育、抗肿瘤、延缓衰老以及免疫调节等作用。

紫草的有效化学成分主要有两大类，一类是脂溶性成分，主要是萘醌类色素，统称总色素；此外还含有酚酸类、生物碱类、苯酚及苯醌类、三萜酸及甾醇类、黄酮类等；另一类是水溶性成分，主要是紫草多糖。从结构角度看，紫草中有效成分萘醌类主要包括紫草素及其衍生物，有乙酰紫草素、异丁酰紫草素等，其母核均为5，8－二羟基萘醌，且都具有异己烯侧链。脂肪酸的成分主要有软脂酸、油酸及亚油酸等；紫草的水溶性成分是酸性多糖(含量2％左右)和酚酸。紫草水提物及醇提物都有一定的抗炎、镇痛作用。2015版《中国药典》规定紫草羟基萘醌总色素以左旋紫草素计不得少于0.8％，β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁不得少于0.3％。显然质量控制还不够完全。因此需要建立紫草的指纹图谱，为紫草的质量评价和控制提供更有力的依据，同时为其鉴别提供依据。

指纹图谱技术能对中药进行整体、宏观和全面的分析表达，已被公认为天然药物质量控制最有效的方法之一。目前紫草的分析方法主要有薄层扫描法(TLC)、紫外-可见分光光度法、气相色谱法(GC)、液相色谱法(HPLC)。薄层扫描法操作程序过多，影响因素不易消除；TLC常需配合一些辅助手段，过程复杂；HPLC分析时间长、试剂成本高、样品处理较繁琐。李方悦、江林等均采用HPLC法建立了新疆紫草的指纹图谱。但由于新疆紫草的成分复杂，需要采用梯度洗脱，时间长，处理繁琐，分析成本高且污染环境。新疆紫草是国家二级保护植物，是紫草的主要来源，有道地药材之誉。因此需要一种方便快捷、稳定可靠的分析方法来建立新疆紫草的指纹图谱，来进行更完善的质量控制。

毛细管电泳(capillary electrophoresis，CE)，又称高效毛细管电泳(highperformance capillary electrophoresis，HPCE)，是一种高效分离技术，具有高效、快速、进样体积小、溶剂消耗少和抗污染能力强等特点，在中药有效成分分析、指纹图谱研究方面显示出显著的优势。目前尚未见基于HPCE建立的新疆紫草的指纹图谱的方法。

本申请人在先发表的文章“毛细管电泳分离法检测新疆紫草中萘醌类成分”中，利用毛细管电泳对新疆紫草中的萘醌类成分进行了检测分离。实验条件为检测波长200nm，运行缓冲液为含20％乙醇的硼酸盐缓冲液(0.1mol·L^-1，pH＝8.0)，进样量3.45kPa×5s，分离电压20kV。但该技术制备粗提物后对萘醌类成分进一步处理的较为繁琐，对紫草的有效成分紫草素的分离效果也较差，对新疆紫草提取物其它成分的检测效果和分离效果不好，同时为降低200nm检测波长下溶剂峰的干扰，因此需进一步探索更优良的电泳条件。

有鉴于此特提出本发明。

发明内容