[发明专利]一种单纯疱疹病毒I型和II型抗原联检试剂盒有效

专利信息
申请号: 201710008366.7 申请日: 2017-01-05
公开(公告)号: CN106680498B 公开(公告)日: 2018-03-13
发明(设计)人: 陈立国;邹伟权;张亚丽;李庆祥;母润红;王涛;苏焱 申请(专利权)人: 广州华弘生物科技有限公司
主分类号: G01N33/569 分类号: G01N33/569;G01N33/558
代理公司: 广州胜沃园专利代理有限公司44416 代理人: 张帅
地址: 510530 广东省广州市高新技*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 单纯 疱疹病毒 ii 抗原 联检 试剂盒
【说明书】:

技术领域

发明属于生物医药领域,具体涉及一种单纯疱疹病毒I型和II型抗原联检试剂盒。

背景技术

单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus,HSV)属于人类疱疹病毒α亚科,是DNA双链病毒,人类是其唯一自然宿主。根据其抗原性质的不同,可分为单纯疱疹病毒I型(HSV-1型)型和单纯疱疹病毒II型(HSV-2型),两者之间的基因同源序列约为50%。HSV-1型多感染口、面、眼等腰部以上部位,而HSV-2型则通常感染生殖器及肛周等腰以下部位。疱疹的典型临床表现出皮肤粘膜上出现集簇性水疱、脓疱、溃疡和结痂。

生殖器疱疹是由单纯疱疹病毒感染泌尿生殖器及肛门部位皮肤粘膜而引起的一种常见性转播疾病。在生殖器疱疹的病原体中,HSV-2型约占80%,HSV-1型约占10~40%。

近年来,生殖器部位溃疡性疾病的发病率大幅上升,其中,可供临床普遍应用的疱疹诊断试剂非常缺乏。目前,疱疹的诊断仍主要依靠医生的临床经验,或通过排除梅毒的实验诊断方法来进行间接诊断,误诊率好,常延误患者的及时准确治疗。并且目前常用的方式是分别单独检测单纯疱疹病毒I型和II型,再综合分析检测结果,但是这样的操作过程繁琐,因此有必要研发一种可以快速联检单纯疱疹病毒I型和II型抗原的方法。

目前,单纯疱疹病毒的实验室诊断方法有细胞培养、抗原检测、PCR、血清抗体检测等。细胞培养及PCR方法对实验场地等实验条件及人员的要求较高,均不能在大部分的实验室开展。检测抗原的直接免疫荧光或ELISA方法均需依赖相应的仪器设备,而且试剂多为进口,价格昂贵。血清抗体或抗原检测如常用的胶体金免疫层析法,其特异性强、灵敏度高、操作简捷等优点而并广泛应用,但是胶体金免疫层析法的反应过程是一个由胶体金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程,在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败,其中制备颗粒均匀、分散度好的胶体金在胶体金免疫层析法快速试验中非常关键。如果胶体金颗粒直径的变异范围太大就会影响到检测的稳定性和重复性,如果胶体金颗粒的形状不规则或粒径不均一,使得胶体金标记颗粒容易解离和沉淀而产生胶体金标记颗粒扩散不完全、反应区底色过深和假阳性现象。胶体金溶液的制备有许多种方法,其中最常用的是柠檬酸三钠法,其原理是向一定浓度的金溶液内加入一定量的柠檬酸三钠使金离子还原成金原子。柠檬酸三钠还原法作为制备胶体金的经典方法,工艺简便,成本低廉,但在实际应用过程中很容易出现颗粒聚集、颗粒大小不均一等不足,严重影响胶体金在免疫分析中的应用。颗粒均一、单分散性胶体金的制备与还原剂的加入量、反应时间、pH值、加热方式等因素有密切的关系。另外,由于胶体金具有强烈的电荷性,通过静电吸附抗体或蛋白,在pH等变化下,很容易造成抗体和蛋白的脱离,并且吸附抗体或蛋白后的胶体金不稳定,导致试剂盒的稳定性和灵敏性无法保障。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题(如柠檬酸三钠法制得的胶体金颗粒的形状不规则或粒径不均一,导致胶体金的应用效果不佳,影响检测过程和结果等),本发明提供了一种单纯疱疹病毒I型和II型抗原联检试剂盒,该试剂盒可快速联检单纯疱疹病毒I型和II型抗原,并且检测结果灵敏度、准确度高,稳定性好,特异性强。

本发明提供的一种单纯疱疹病毒I型和II型抗原联检试剂盒,所述试剂盒由试剂条和塑料卡组装而成,所述试剂条包括底板,所述底板上粘贴有带有检测线和质控线的反应膜,所述反应膜靠近检测线的一端依次叠加粘贴有胶体金垫、样品垫,所述反应膜靠近质控线的一端叠加粘贴有吸收垫,所述反应膜上有两条检测线(T1线和T2线),分别包被了单纯疱疹病毒I型和II型多克隆抗体,所述反应膜上质控线(C线)包被了羊抗鼠IgG抗体,所述胶体金垫上包被了胶体金标记的鼠源抗单纯疱疹I型和II型单克隆抗体;

所述反应膜由以下方法制得:用缓冲液将单纯疱疹病毒I型和II型多克隆抗体分别稀释至包被浓度为0.8~1.2mg/mL,将羊抗鼠IgG抗体稀释至包被浓度为1.5~1.8mg/mL,在反应膜上分别划线单纯疱疹病毒I型、II型多克隆抗体检测线和羊抗鼠IgG抗体质控线,划线后将反应膜置于干燥间,温度20~25℃,湿度小于30%,干燥4~5小时;

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