[发明专利]一种基因转录产物的检测方法及其应用

说明书

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种基因转录产物的检测方法及其应用，本发明采用同时检测人同一基因的信使RNA和环状RNA表达的检测方法，能显著提高被检测基因的稳定性，和显著提高检测的敏感性，本方法可以广泛用于法医学生物检材组织来源鉴定的检测，具有非常高的法医学价值。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种基因转录产物的检测方法及其应用。

背景技术

在法医学领域，生物检材的组织/体液来源鉴定是法医学检测的重要环节。犯罪现场遗留的生物检材的来源鉴定可以有助于推断案件发生过程和重建现场，为案件的性质定性。如在一些可疑性犯罪案件中，只进行DNA分型不足以将案件定性为性犯罪，如果能确证有精液和阴道分泌液的成分，则可为案件的定性提供强有力的证据。

现有技术公开了法医学鉴定体液来源的方法很多，早期的方法是基于酶促反应或免疫学检测，其方法通常快速/简便，但是需要的检材量大/耗时/特异性敏感性差，且检测结果依赖操作者的水平和经验。目前主要有三种体液鉴定的方法，是基于三种不同的遗传标记，其中，第一种，信使RNA检测法，是目前研究最为广泛且已被用于体液鉴定；现已发现很多体液相关特异表达且表达量高的生物标记分子，此方法具有很大的优点，可以同时提取DNA和RNA，节省检材，而通常法医检案都是微量检材；另外可以进行多重复合扩增反应，同时检测多种体液标记分子，短时间内获得更多信息量；但是信使RNA存在有致命的缺点，就是容易降解，而法医检材通常是降解/陈旧的检材；第二种，微小RNA（microRNA）检测法，microRNA是一类非编码小分子RNA，长度约18-25个核苷酸，很短，研究表明其不易降解，解决了信使RNA容易降解的问题，且其具有组织/细胞特异性表达的特性；但是由于太短，不能进行复合扩增；第三种，DNA甲基化标记检测法，DNA甲基化是碱基的复制后共价修饰，是储存表观遗传学信息的主要形式；但是此法消耗DNA，微量检材不适用，同时机体DNA甲基化受到很多因素影响，如年龄；研究发现随年龄增长，基因甲基化水平总体下降，但是某些特定的DNA甲基化却增高。因此业内需要一个更加稳定、敏感且简便的检测方法。

环形RNA（circular RNA，circRNA）是最近报道的一类非编码小RNA分子，circRNA是在pre-mRNA剪切过程中，外显子的5'端与3'端以反向剪切（backsplicing）形式形成3',5'磷脂键连接的环形RNA，广泛存在于哺乳动物的各种不同类型的细胞中。目前该技术领域对于circRNA的功能研究较少，现有的研究表明，circRNA具有micro分子海绵、调控基因表达等功能，并与细胞功能和疾病具有密切作用。circRNA有如下特点：1）环形结构，无3’末端poly A尾，无5’末端加帽结构；2）耐受RNase R 的降解；3）组织/细胞特异性表达；4）含量丰富；这些特征使得circRNA可能在法医学领域是一类非常理想的生物标记分子。由于circRNA的稳定性和组织表达特异性，可以使之运用于体液鉴定，特别地，对于陈旧检材、降解检材和微量检材检测可能更具有优越性。

δ氨乙酰丙酸合成酶2（δ-aminolevulinatesynthase 2，ALAS2）是外周血特异表达的基因，以往的研究使用ALAS2的信使RNA用于外周血的鉴定。基质金属蛋白酶7（matrixmetallopeptidase 7，MMP7）是月经血特异表达的基因，以往的研究使用MMP7的信使RNA用于月经血的鉴定。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种基因转录产物的检测方法及其应用。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的限制，提供一种灵敏性更高的法医学生物检材组织来源的检测方法，具体涉及一种同时检测人同一基因的信使RNA和环状RNA表达的检测方法，该方法可以应用于法医学生物检材组织来源的检测。

本发明基于发明人在长期的研究中发现同时检测信使RNA和环状RNA可以提高法医学生物检材组织来源的鉴别能力，特别是对于陈旧检材、降解检材和微量检材具有非常高的鉴别能力。