[发明专利]用于间充质干细胞（MSC）体外贴壁培养扩增的分子组合与应用

权利要求书

1.用于间充质干细胞(MSC)体外贴壁培养扩增的分子组合，包括：(1)凝血酶；(2)孕酮；(3)转化生长因子β1(TGF-β1)；(4)抗坏血酸；(5)氢化考的松或氢化考的松盐。

2.根据权利要求1所述的用于间充质干细胞(MSC)体外贴壁培养扩增的分子组合，其特征在于：加入基础培养基中，所述凝血酶的可选含量为100-20000U/L(0.1-20U/mL)，推荐含量为100-1000U/L(0.1-1U/mL)，优选含量为500U-1000U/L(0.5-1U/mL)。

3.根据权利要求1或2所述的用于间充质干细胞(MSC)体外贴壁培养扩增的分子组合，其特征在于：加入基础培养基中，所述孕酮的可选含量为1-100μg/L(1-100ng/mL)，推荐含量为10-50μg/L(10-50ng/mL)，优选含量为20-30μg/L(20-30ng/mL)。

4.根据权利要求1或2或3所述的用于间充质干细胞(MSC)体外贴壁培养扩增的分子组合，其特征在于：加入基础培养基中，所述转化生长因子β1(TGF-β1)的可选含量为0.5-20μg/L(0.5-20ng/mL)，推荐含量为1-10μg/L(1-10ng/mL)，优选含量为1-3μg/L(1-3ng/mL)。

5.根据权利要求1至4任一项所述的用于间充质干细胞(MSC)体外贴壁培养扩增的分子组合，其特征在于：加入基础培养基中，所述抗坏血酸的可选含量为10-100mg/L(10-100μg/mL)，推荐含量为10-30mg/L(10-30μg/mL)，优选含量为20-25mg/L(20-25μg/mL)。

6.根据权利要求1至5任一项所述的用于间充质干细胞(MSC)体外贴壁培养扩增的分子组合，其特征在于：加入基础培养基中，所述氢化考的松或氢化考的松盐(如氢化考的松琥珀酸盐、氢化考的松丁酸盐、醋酸氢化考的松等)的可选含量为10^-9M-10^-6M/L(10^-12M-10^-9M/mL)，推荐含量为10^-8-10^-7M/L(10^-11M-10^-10M/mL)，优选含量为1-2×10^-8M/L(1-2×10^-11M/mL)。

7.用于间充质干细胞体外贴壁培养扩增的MSC培养基，包括基础培养基和权利要求1至6任一项所述分子组合，所述基础培养基是添加了人白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、硒、乙醇胺、脂类混合物、生物素和氨基酸的IMDM培养基，每升(/L)基础培养基含有：IMDM粉剂17.7g，NaHCO₃ 3.24g，人白蛋白0.5-5g，胰岛素-转铁蛋白-硒混合物1-10mL，乙醇胺1-10×10^-5M，脂类混合物1-10mL，生物素1-20mg，丙酮酸钠55-220mg，羟乙基哌嗪乙硫磺酸1-20mM，L-谷氨酰胺146-730mg，多胺混合物1-10mL，RPMI1640氨基酸溶液1-20mL。

8.根据权利要求7所述的用于间充质干细胞体外贴壁培养扩增的MSC培养基，其特征在于：每升(/L)基础培养基中添加凝血酶100-1000U，孕酮10-50μg，转化生长因子β1(TGF-β1)1-10μg，抗坏血酸10-30mg，氢化考的松或氢化考的松盐10^-8-10^-7M。

9.根据权利要求8所述的用于间充质干细胞体外贴壁培养扩增的MSC培养基，其特征在于：优选每升(/L)基础培养基中添加凝血酶500-1000U，孕酮20-30μg，转化生长因子β1(TGF-β1)1-3μg，抗坏血酸20-25mg，氢化考的松或氢化考的松盐1-2×10^-8M。

10.一种体外贴壁培养扩增间充质干细胞(MSC)的方法，是将间充质干细胞接种于装有权利要求7-9任一所述MSC培养基的培养瓶/皿中，在37℃、5％CO₂、100％湿度条件下培养，使间充质干细胞贴壁生长并得到扩增；所述间充质干细胞来源于人脐带或人骨髓。