[发明专利]一种制备鲑鱼降钙素的方法

权利要求书

1.一种制备鲑鱼降钙素的方法，依次包括如下步骤：

（1）将含有表达盒的重组载体导入受体植物，得到转基因植物；转基因植物中表达融合蛋白；所述表达盒自上游至下游依次包括如下元件：植物油体蛋白基因的启动子、融合基因和终止序列；所述植物油体蛋白基因的启动子为油菜油体蛋白基因的启动子；

所述融合基因中含有区段丙、区段甲、区段丁和区段乙；所述区段丙编码蛋白标签；所述蛋白标签为6×His标签；所述区段甲编码植物油体蛋白；所述植物油体蛋白为芝麻油体蛋白；所述区段丁为蛋白酶的酶切识别序列；所述区段乙编码鲑鱼降钙素的前体；所述鲑鱼降钙素的前体为氨基酸序列如序列表中序列5自N末端起第158至190位所示的蛋白质；所述区段乙为序列表中序列1自5′末端起第22至120位所示的DNA分子；

（2）取转基因植物的种子，提取油体；

（3）利用所述蛋白标签从所述油体中纯化所述融合蛋白；

（4）取步骤（3）得到的融合蛋白，用蛋白酶进行酶切；

（5）从步骤（4）的酶切产物中分离鲑鱼降钙素；

（6）醋酸化；

（7）脱盐；

所述受体植物为油菜品种中双4号。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述蛋白酶为满足如下条件的蛋白酶：所述蛋白酶对于所述融合基因的表达产物的酶切位置为特定氨基酸残基与其前一位氨基酸残基之间；所述特定氨基酸残基为所述鲑鱼降钙素的前体的第一个氨基酸残基。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述蛋白酶为肠激酶。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述“提取油体”的步骤为：先粉碎转基因植物的种子，然后用提取缓冲液提取；所述提取缓冲液为含2.0-3.0mM EDTA和400-600mM NaCl的pH7.5-8.5、15-25mM Tris-HCl缓冲液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（5）中，所述“分离鲑鱼降钙素”采用阳离子交换层析进行分离。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（6）中，所述醋酸化的步骤为：调节步骤（5）分离的鲑鱼降钙素的pH值至1.0-3.0，然后加入醋酸钠处理40-80min。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（7）中，所述脱盐为反相色谱脱盐。

8.如权利要求1至7任一所述的方法，其特征在于：完成步骤（7）后，还包括冻干的步骤。