[发明专利]一种油菜遗传转化的方法

权利要求书

1.一种油菜遗传转化方法，依次包括如下步骤：

（1）将含有目的基因的重组表达载体导入农杆菌，得到重组农杆菌；

（2）取步骤（1）得到的重组农杆菌，对油菜的外植体进行侵染；所述油菜的外植体为油菜的子叶；

（3）完成步骤（2）后，取所述外植体，置于共培养培养基，进行共培养；所述共培养培养基中含有1.0-1.5mg/L 1-萘乙酸、4.0-6.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤和4.0-6.0mg/L AgNO₃；

所述共培养的条件为23-27℃、暗培养3-5天；

（4）完成步骤（3）后，取所述外植体，置于选择培养基，进行培养；所述选择培养基中含有0.8-1.2mg/L 1-萘乙酸、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤和80-120mg/L头孢噻吩；

所述培养的条件为23-27℃、光暗交替培养3-5天；

（5）完成步骤（4）后，取所述外植体，置于分化培养基进行培养，获得分化芽；所述分化培养基中含有0.1-0.3mg/L 1-萘乙酸、1.0-3.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、30-50mg/L卡那霉素和80-120mg/L 头孢噻吩；

所述培养的条件为23-27℃、光暗交替培养3-5周；

（6）完成步骤（5）后，取所述分化芽，置于生根培养基进行培养；所述生根培养基中含有80-120mg/L卡那霉素和80-120mg/L 头孢噻吩；获得转基因油菜；所述培养的条件为23-27℃；

所述油菜为油菜品种中双4号。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述油菜的子叶的获取方式为：将无菌的油菜种子接种于培养基，光暗交替培养5-12d，然后取子叶部分。

3.如权利要求1或2任一所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述“侵染”的步骤如下：将所述油菜的子叶置于农杆菌侵染液中8-15min；所述农杆菌侵染液为将所述重组农杆菌悬浮于侵染培养基得到的；所述侵染培养基中含有80-120mg/L 乙酰丁香酮。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述农杆菌侵染液的OD_600nm值为0.15～0.25。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，所述“含有目的基因的重组表达载体”为含有表达盒的重组质粒；所述表达盒自上游至下游依次可包括如下元件：植物油体蛋白基因的启动子、融合基因和终止序列；

所述融合基因中可含有区段甲和区段乙；所述区段甲编码植物油体蛋白；所述区段乙编码鲑鱼降钙素的前体；所述鲑鱼降钙素的前体可为氨基酸序列如序列表中序列5自N末端起第158至190位所示的蛋白质。