[发明专利]一种油菜遗传转化的方法

说明书

本发明公开了一种油菜遗传转化方法。该方法依次包括如下步骤：(1)将含有目的基因的重组表达载体导入农杆菌，得到重组农杆菌；(2)取重组农杆菌，对油菜的外植体进行侵染；(3)取所述外植体，置于共培养培养基，进行共培养；(4)取所述外植体，置于选择培养基，进行培养；(5)取所述外植体，置于分化培养基进行培养，获得分化芽；(6)取所述分化芽，置于生根培养基进行培养，获得转基因油菜。实验证明，采用本发明提供的方法进行油菜遗传转化，转化效率高(达12.0％‑12.5)，耗时短，为油菜转基因提供了强大的工具，具有非常重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种油菜遗传转化的方法。

背景技术

油菜是重要的油料作物。20世纪70年代前，油菜的遗传改良都是通过杂交、诱变等传统育种方法来实现的。自1985年首次利用根癌农杆菌介导法获得转基因甘蓝型油菜以来，油菜的转基因研究迅速发展，特别是近年来基因重组和转基因技术的出现，更是为油菜的遗传改良开辟了新的路径。然而，广泛栽培的油菜品种中还没有一种已建立较为理想的转化体系。油菜遗传转化效率低已经成为制约油菜功能基因组学研究和油菜转基因研究的瓶颈问题。目前常用的油菜品种是欧洲型油菜模式品种Westar，其获得转基因植株需要6-8周，转化效率约为0.8％。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供转化效率较高的油菜遗传转化方法。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种油菜遗传转化方法。

本发明所提供的油菜遗传转化方法，依次可包括如下步骤：

(1)将含有目的基因的重组表达载体导入农杆菌，得到重组农杆菌；

(2)取步骤(1)得到的重组农杆菌，对油菜的外植体进行侵染；

(3)完成步骤(2)后，取所述外植体，置于共培养培养基，进行共培养；

(4)完成步骤(3)后，取所述外植体，置于选择培养基，进行培养；

(5)完成步骤(4)后，取所述外植体，置于分化培养基进行培养，获得分化芽；

(6)完成步骤(5)后，取所述分化芽，置于生根培养基进行培养，获得转基因油菜。

上述方法中，所述共培养培养基中含有1.0-1.5mg/L 1-萘乙酸、4.0-6.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤和4.0-6.0mg/L AgNO₃。所述选择培养基中含有0.8-1.2mg/L 1-萘乙酸、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤和80-120mg/L头孢噻吩。所述分化培养基中含有0.1-0.3mg/L 1-萘乙酸、1.0-3.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、30-50mg/L卡那霉素和80-120mg/L头孢噻吩。所述生根培养基中含有80-120mg/L卡那霉素和80-120mg/L头孢噻吩。

所述共培养培养基具体可为含有1.25mg/L 1-萘乙酸、5.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤和5.0mg/L AgNO₃的MS₀培养基。所述选择培养基具体可为含有1.0mg/L 1-萘乙酸、3.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤和100mg/L头孢噻吩的MS₀培养基。所述分化培养基具体可为含有0.2mg/L1-萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、40mg/L卡那霉素和100mg/L头孢噻吩的MS₀培养基。所述生根培养基具体可为含有100mg/L卡那霉素和100mg/L头孢噻吩的MS₀培养基。

上述方法中，所述步骤(2)中，所述油菜的外植体可为所述油菜的子叶。