[发明专利]一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于皮肤修复技术领域，具体涉及一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途。

背景技术

近年来，间充质干细胞分泌的因子已成为研究热点，这些细胞因子可有效调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞。将细胞因子添加到美容化妆品，不仅具有一般化妆品的保湿美白功效，还能够修复受损皮肤，消除皮肤皱纹，收缩毛孔，改善面色等，越来越受到人们的关注。然而市面上的细胞因子化妆品一般采用直接掺入或经冻干后掺入化妆品基质的方式制造，细胞因子含量较低，且含有大量糖分等其它杂质，使用这些化妆品后反而会造成皮肤干燥脱皮等不适感。

公开号为CN 105543313 A的申请公开了一种分离人源间充质干细胞因子的方法以及一种细胞因子化妆品或药物，每100ml化妆品或药物中包含权利要求6所述的间充质干细胞因子冻干粉0.5～1.5g，生物多糖胶0.1～1g，胶原蛋白1～5ml。但是其效果有待进一步改进。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途。

本发明人源脂肪间充质干细胞因子的制备方法，它包括如下步骤：取人脂肪间充质干细胞，置于高辅酶无血清培养基中，培养至细胞汇合度75～85％时，收集上清液，即可；其中，所述高辅酶无血清培养基是每1L添加有辅酶A 10mg～28mg、辅羧酶5mg～15mg、黄素腺嘌呤二核苷酸4mg～12mg、尿苷酸磷酸0.5mg～2.5mg的间充质干细胞无血清培养基。

优选地，所述培养是在低氧条件下培养，其中，24h内细胞的氧浓度为21％，24h～26h氧浓度由21％均匀降到18％，第27h的氧浓度为18％，第28～36h氧浓度由18％均匀降到8％，第37h的氧浓度为8％，第38h～44h氧浓度由8％均匀降到2％，后持续于2％的氧浓度下培养；优选地，所述的细胞活率为97.3％。

本发明还提供了一种人源脂肪间充质干细胞因子浓缩液的制备方法，步骤如下：

a、按照前述的方法培养，得培养液上清；

b、过滤、浓缩。

其中，所述过滤、浓缩方法是：先采用0.22μm滤膜过滤；然后通过40KD超滤膜，收集透析液，再将透析液通过100D超滤膜，收集截留液，得到细胞因子浓缩液,即可。

本发明还提供了前述方法制备得到的人源脂肪间充质干细胞因子浓缩液。

本发明还提供了一种人源间充质干细胞因子冻干粉的制备步骤，如下：取前述细胞因子浓缩液，冻干，得人源间充质干细胞因子冻干粉。

其中，冻干前，先加入冻干保护剂；其中，所述冻干保护剂每100ml中含有如下组分：生育酚0.5g、谷胱甘肽0.4g，人白蛋白0.5ml,右旋糖苷3.5g、海藻糖1.5g，甘露醇4g、羟脯氨酸0.05g、精氨酸0.2g、组氨酸0.2g、蛋氨酸0.2g、酪氨酸0.2g、氨基乙酸2g、柠檬酸钠0.26g。

本发明还提供了前述方法制备得到的人源间充质干细胞因子冻干粉。

本发明还提供了前述细胞因子浓缩液或前述细胞因子冻干粉在制备化妆品或者修复皮肤损伤的药物中的用途。

本发明还提供了一种细胞因子化妆品或药物，每10ml化妆品或药物中包含前述间充质干细胞因子冻干粉0.005～0.05g，生物多糖胶0.1～0.145g，胶原蛋白溶液0.3ml，叶酸0.05g；优选地，每10ml中化妆品或药物中包含前述的间充质干细胞因子冻干粉0.05g，生物多糖胶0.1g，胶原蛋白溶液0.3ml，叶酸0.05g。

本发明分离纯化人源脂肪间充质干细胞因子的方法，通过特定的低氧培养体系和培养基培养得到高浓度细胞因子培养液，并且可有效去除间充质干细胞培养液中的杂质，而且得到的细胞因子纯度高，产量高，并且脂肪组织取材容易，不再依托脐带组织来源，成本低廉。本发明的间充质干细胞因子浓缩液能够促进表皮细胞营养代谢；促进皮下胶原细胞功能，加速皮肤胶原细胞生长，增加胶原分泌，具有预防和修复皮肤损伤，延缓衰老，抗皱及美白等功效，而且使用时无皮肤干燥等不适感。

本发明的间充质干细胞因子浓缩液与其他原料制备而成的化妆品或药品，可以增强其皮肤修复、抗老化、祛皱美白等美容护肤功效，具有良好的市场前景。

下面通过具体实施方式对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

附图说明