[发明专利]一种全血DNA提取试剂盒及提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及DNA提取技术领域，具体涉及全血DNA提取试剂盒及其提取方法。

背景技术

随着分子生物学技术的发展，基因组水平上的研究已成为热点。在分子遗传学和分子流行病学中，无论是全基因组关联分析(GWAS)、候选SNP位点基因分型，还是基因组文库的建立，都需要从各类样本中提取基因组DNA。由于血液样本取材方便，所含基因组DNA丰富可靠，因此上述许多研究均以血液作为样本提取完整的基因组DNA。提取纯化得到的基因组DNA浓度、纯度和一级结构的完整性都会影响到后续的研究，因此高效、可靠的基因组DNA提取方法是分子遗传学基础研究迫切需要的。

目前基因组DNA提取纯化的方法有很多种，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、离心柱法和磁珠法。这些方法各有优缺点，但都应考虑以下原则：防止和抑制DNase对DNA的降解；尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏，保持DNA分子的完整；排除其他核酸分子的污染；排除有机溶剂和金属离子的污染；将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干净。

基于纳米磁珠的DNA提取技术是利用亲水性纳米磁珠特异性地吸附样品溶液的DNA分子，在外加磁场的作用将吸附的DNA-磁珠复合物从样品溶液中分离，通过洗涤液洗涤去除溶液中的蛋白和盐离子，最后在仅留有特异吸附DNA的磁珠中加入洗脱液，将DNA释放于洗脱液中。磁珠法提取基因组DNA与上述其它方法相比，不使用有毒试剂，操作简单，不易污染，已经成为目前分子生物学和临床检验医学研究的理想方法。

发明内容

为了解决上述不足的缺陷，本发明提供了一种全血DNA提取试剂盒及提取方法，提取纯化步骤少，操作简便，整个过程不涉及有毒试剂，安全便捷，所得基因组DNA含量高，完整度好，纯度高，可直接用于后续检测。

本发明提供了一种全血DNA提取试剂盒，包括裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液。

上述的试剂盒，其中，所述裂解液包括异硫氰酸胍、碘化锂、柠檬酸三钠、Tween 20，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe₃O₄,洗涤液A包括异硫氰酸胍、Tris-HCL和无水乙醇，所述洗涤液B包括Tris-HCL、NaCL和无水乙醇，所述洗脱液包括Tris-HCL、EDTA二钠。

上述的试剂盒，其中，所述裂解液pH值为4.0-7.0，包含浓度3-5mM的异硫氰酸胍、浓度1-5M的碘化锂、浓度50-200mM的柠檬酸三钠和1％-5％Tween20。

上述的试剂盒，其中，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe₃O₄，直径为200-2000nm，浓度为50-200mg/ml。

上述的试剂盒，其中，所述洗涤液A包含浓度1-4mM的异硫氰酸胍、pH 7.0-9.0浓度10-50mM的Tris-HCL和20％-50％的无水乙醇。

上述的试剂盒，其中，所述洗涤液B包含pH 7.0-9.0浓度1-5mM的Tris-HCL、浓度10-50mMNaCL和50％-80％的无水乙醇。

上述的试剂盒，其中，所述洗脱液包含pH为7.0-9.0浓度5-20mM的Tris-HCL和pH 8.0-9.0浓度0.5-3mM的EDTA二钠。

本发明的另一面，本发明还提供了一种全血DNA提取试剂盒的提取方法，包括以下步骤：

步骤S1：取50-200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中，使用无菌移液枪头向该离心管中加入100-500ul裂解液和50-200mg/ml的纳米磁珠10-30ul，震荡混匀1min，室温静置10min；

步骤S2：将步骤S1中的离心管置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液；

步骤S3：使用无菌移液枪头向步骤S2离心管中加入500-800ul洗涤液A，将该离心管震荡混匀1min，置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液；

步骤S4：使用无菌移液枪头向步骤S3离心管中加入500-800ul洗涤液B，将该离心管震荡混匀1min，置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液，室温开盖干燥10-20min直至管内无液体残留；

步骤S5：使用无菌移液枪头向步骤S4离心管中加入100-200ul洗脱液，65℃水浴5-10min；