[发明专利]一种O型口蹄疫抗体检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，包括O型口蹄疫VP1蛋白偶联或间接偶联磁性微粒的溶液，发光标记物标记的蛋白溶液和发光底物。

2.如权利要求1所述的O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述O型口蹄疫VP1蛋白偶联磁性微粒的溶液制备方法包括如下步骤：

S1，取含磁性微粒的溶液，采用缓冲液清洗磁性微粒，并悬浮于缓冲液中；

S2，加入纯化的O型口蹄疫VP1蛋白；

S3，加入交联剂或催化剂，振荡反应；

S4，磁铁吸附磁性微粒，洗涤，悬浮在含有封闭剂的溶液中。

3.如权利要求1所述的O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述O型口蹄疫VP1蛋白间接偶联磁性微粒的溶液的制备方法包括如下步骤：

1)磁性微粒结合亲和素

S1，取含磁性微粒的溶液，采用缓冲液清洗磁性微粒，并悬浮于缓冲液中；

S2，加入亲和素；

S3，加入交联剂或催化剂，振荡反应；

S4，磁铁吸附磁性微粒，洗涤，悬浮在含有封闭剂的溶液中，构成磁性微粒-亲和素复合物；

2)O型口蹄疫VP1蛋白结合生物素

S1，取O型口蹄疫VP1蛋白，透析；

S2，加入生物素，反应；

S3，加入封闭剂，反应；

S4，透析除去未结合的生物素，获得O型口蹄疫VP1蛋白-生物素；

3)磁性微粒-亲和素与O型口蹄疫VP1蛋白-生物素复合物混合，通过亲和素与生物素的结合力连接磁性微粒与O型口蹄疫VP1蛋白。

4.如权利要求1所述的O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述发光标记物标记的蛋白溶液的制备方法包括如下步骤：

S1，取与O型口蹄疫VP1蛋白或O型口蹄疫VP1蛋白抗体特异性结合的蛋白，透析；

S2，加入发光标记物，反应；

S3，加入封闭剂，反应；

S4，透析分离未结合的发光标记物。

5.如权利要求1所述的O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述O型口蹄疫VP1蛋白选自O型口蹄疫病毒VP1蛋白全长、天然VP1蛋白片段、重组表达的O型口蹄疫VP1蛋白全长、重组表达的VP1蛋白片段、VP1蛋白多肽、VP1蛋白化学合成物中的一种或多种的组合，所述的磁性微粒为以Fe₃O₄为核心，表面覆有聚合物涂层，并导入羟基、羧基、磺酰基或氨基活性基团的微粒。

6.如权利要求1所述的O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述发光标记物选自吖啶酯、碱性磷酸酶、过氧化物酶中的任意一种，所述发光标记物标记的蛋白选自O型口蹄疫抗原、单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体、抗猪IgG抗体、抗猪IgM抗体中的一种或多种的组合。

7.如权利要求1所述的O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述发光底物与发光标记物一一对应。

8.如权利要求1所述的O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括稀释液，质控品，校准品和清洗液，所述稀释液选自缓冲液、牛血清白蛋白、阻断剂、单克隆抗体、多克隆抗体、O型口蹄疫抗原中的一种或多种的组合。

9.如权利要求8所述的O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述质控品为O型口蹄疫抗体低值质控品和高值质控品，所述低值质控品的浓度为10-50U/mL，所述高值质控品的浓度为50-150U/mL；所述清洗液为0.05mol/L pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液或0.01mol/L pH为7.0的磷酸盐(PBS)缓冲液，所述Tris缓冲液和PBS缓冲液中分别含有0.1％的Tween-20。

10.一种O型口蹄疫抗体的检测方法，采用权利要求1-9任一项所述的O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，包括如下步骤：

S1，向反应容器中依次加入10-50μL待测样品或校准品、20-50μL O型口蹄疫VP1蛋白偶联或间接偶联磁性微粒的溶液；

S2，于35-39℃下反应10-20分钟；

S3，用磁铁进行吸附，吸去上清液，加入200-500μL清洗液洗涤，弃去清洗液；

S4，向S3中加入100-200μL发光标记物标记的蛋白溶液；

S5，重复S2和S3的步骤；

S6，向S5中加入发光底物于35-39℃下反应0.5-10分钟；

S7，用化学发光仪检测发光值，绘制校准曲线，根据校准曲线计算待测血清中抗体的浓度。