[发明专利]一种O型口蹄疫抗体检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种O型口蹄疫抗体检测试剂盒及其检测方法，本发明的试剂盒采用磁性微粒包被的抗原、发光标记物标记的蛋白与待测样本中的抗体发生特异性反应而进行待测样品中抗体含量的测定。本发明的试剂盒实现O型口蹄疫抗体的定量检测，灵敏度高，检测范围宽，快速，重复性好，全自动操作及高通量检测的效果。

技术领域

本发明涉及O型口蹄疫抗体检测技术领域，尤其涉及一种O型口蹄疫抗体检测试剂盒及采用该试剂盒进行检测的检测方法。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-MouthDisease Virus，FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疾病。感染对象是猪、牛、羊等主要畜种及其他家养和野生偶蹄动物，易感动物多达70余种。口蹄疫的发病率为100％，爆发可使农场破产，给发病地区和国家的畜牧业遭受巨大打击。因此，世界动物卫生组织(OIE)将该病列在动物疫病之首。

口蹄疫有7个血清型，O型、A型、C型、南非1型、南非2型、南非3型、亚洲1型，各血清型之间无交叉保护。现阶段我国主要流行O型、A型和亚洲1型。口蹄疫病毒基因组为单股正链RNA，长约8.5Kb。基因组的中部是一个大的开发阅读框(ORF)，编码病毒的多聚蛋白，该多聚蛋白经裂解后形成L前导蛋白、P1区结构蛋白、P2区和P3区非结构蛋白。FMDV P1区结构蛋白最终裂解为4种：VP1、VP2、VP3、VP4，其中VP1、VP2、VP3位于抗原蛋白衣壳表面，VP4位于衣壳内部。VP1蛋白是主要的中和性抗原。

我国的防治措施以疫苗免疫接种为主要手段。免疫后动物血清抗体效价与攻毒保护具有相关性，所以通过抗体水平的监测来制定合理、有效的免疫程序是提高群体免疫水平的保证。

目前建立并应用的O型口蹄疫抗体检测方法有ELISA方法、病毒中和试验、免疫荧光法、胶体金试纸条等方法。ELISA方法目前是O型口蹄疫抗体最常用的方法，有固相竞争ELISA、液相阻断ELISA。ELISA所测OD值的范围在0.1-3.5，限定了所测量的抗体范围较窄，只能做到半定量，反应的时间通常在1-2小时左右，时间较长；病毒中和试验是通过O型口蹄疫病毒和抗体在细胞上中进行抗原抗体反应来判定抗体滴度，能较全面反映中和抗体的高低，全过程为病毒滴定、抗体中和、结果判定等过程需5-7天时间，全过程只能人工来操作、判定，重复性差；免疫荧光法通常也是在细胞上操作，存在灵敏度不高，重复性差等缺点；胶体金方法能快速得出结果，但是只能定性，难以定量，限制了应用范围。

专利CN104237513A(公布日为2014.12.24)公开了一种甲状腺过氧化物酶抗体磁性微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括TPO-Ab校准品，TPO-Ab稀释液，偶联有链霉亲和素的磁性微粒悬浮液，生物素标记的TPO-Ab抗原，鼠抗人酶标结合物，TPO-Ab质控品，化学发光液A和B，20倍浓缩洗液和反应管，该试剂盒对甲状腺过氧化物酶抗体的含量进行定量测定，实现灵敏度高，特异性，精密性，稳定性良好的效果。该试剂盒在人抗体上应用广泛，但在动物抗体上还未有报道。

目前的O型口蹄疫抗体检测主要采用的是半定量的ELISA方法，并不能满足定量需求，这一点主要是由于缺乏O型口蹄疫抗体标准品和定量标准、没有准确可重复性的检测方法造成的。与兽医不同，在人医领域，各个疾病的标志物，例如上述的甲状腺过氧化物酶抗体，都已经得到充分研究，建立了通用的国家标准、国际标准或行业标准，定量简单易行，因此不同厂家生产的产品得到了规范，检测结果一致性较好。而在兽医领域，目前的O型口蹄疫抗体检测市场大部分被进口的ELISA定性检测试剂占据，并且各厂家的产品检测结果相差很大，不利于畜牧养殖业发展，亟需建立定量标准以及准确可靠、重复性佳的检测方法。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，本发明的目的是提供一种O型口蹄疫抗体检测试剂盒，它可以定量检测O型口蹄疫抗体的含量。为此，本发明还提供一种利用该试剂盒进行检测的方法，本发明的检测方法灵敏度高、定量检测且检测范围宽、检测时间短、重复性好。