[发明专利]一种精浆肉碱检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种精浆肉碱检测试剂盒，其特征在于，包括R1冻干粉、R2试剂、校准品和冻干精浆质控品；所述R1冻干粉由DTNB、乙酰辅酶A和乙二胺四乙酸二钠溶解在磷酸盐缓冲溶液中冻干获得；所述R2试剂为肉碱乙酰转移酶溶解在磷酸盐缓冲溶液中；所述校准品为肉碱国家标准品溶于硫酸庆大霉素溶液中；所述冻干精浆质控品为定值的精浆肉碱冻干粉。

2.根据权利要求1所述的精浆肉碱检测试剂盒，其特征在于，所述R1冻干粉冻干前溶液中DTNB、乙酰辅酶A和乙二胺四乙酸二钠的最终浓度分别为0.01～1mmol/L、0.025～0.15mg/ml和0.1～0.5mmol/L。

3.根据权利要求1所述的精浆肉碱检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中肉碱乙酰转移酶活性为350～2000U/L。

4.根据权利要求1所述的精浆肉碱检测试剂盒，其特征在于，所述R1冻干粉冻干前和R2试剂所用磷酸盐缓冲溶液pH为7.0～8.0，其中磷酸根浓度为0.05～0.2mol/L，磷酸盐缓冲溶液中还包含防腐剂硫酸庆大霉素，浓度为0.01～0.1g/dl。

5.根据权利要求1所述的精浆肉碱检测试剂盒，其特征在于，所述校准品为肉碱国家标准品溶于浓度为0.01～0.1g/dl的硫酸庆大霉素溶液中，肉碱国家标准品浓度为200～800umol/L。

6.根据权利要求1所述的精浆肉碱检测试剂盒，其特征在于，所述冻干精浆质控品在冻干前加入保护剂蔗糖、甘氨酸和NaCl，以及防腐剂山梨酸钾，使蔗糖、甘氨酸、NaCl和山梨酸钾的浓度分别为0.01～0.02mol/L、0.05～0.1mol/L、0.01～0.03mol/L和0.01～0.03g/dl。

7.根据权利要求6所述的精浆肉碱检测试剂盒，其特征在于，所述冻干精浆质控品的定值范围通过以下步骤获得：

取冻干前精浆等体积的纯化水复溶该冻干精浆质控品，混匀后，分装，-25℃～-20℃保存，备用；从-25～-20℃中每天取出1支分装后冻干精浆质控品，室温下自然解冻，混匀后用该试剂盒每天检测1次，连续1个月，计算这些数据的平均值、标准差、±2倍标准差，以平均值为该质控品的靶值，平均值±2倍标准差为该质控品的定值范围。

8.根据权利要求1所述的精浆肉碱检测试剂盒，其特征在于，包括R1冻干粉、R2试剂、校准品、冻干精浆质控品、说明书和内衬。

9.如权利要求1所述的精浆肉碱检测试剂盒在全自动生化分析仪上的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用的检测步骤为：

(1)试剂和样本的准备：采集精液，待液化后，8000～12000r/min离心5～10min分离精浆，即刻用于检测；试剂盒从2～8℃取出后，于室温下平衡15～30min；其中R1冻干粉加冻干前等体积的纯化水复溶，摇匀，即得R1试剂；

(2)设置全自动生化分析仪的主、副波长分别为400～420nm、660～700nm，R1/样本/R2加样量按体积比80:1:20；范围为(80～240μl)：(1～3μl)：(20～60μl)；

(3)检测方法：终点法，加入R1和样本后混匀，37℃孵育5min后测定吸光度A1，加入R2后混匀37℃孵育4～6min，测定吸光度A2，并计算吸光度的变化(△A＝A2-A1)；

(4)计算公式：

样本中肉碱浓度(μmol/L)＝K×△A+B

式中，K和B分别为校准曲线的斜率和截距，通过全自动生化分析仪自动测定校准品得到；

△A通过全自动生化分析仪自动测定样本得到；

(5)取冻干前精浆等体积的纯化水复溶冻干精浆质控品，混匀后，分装，-25～-20℃保存，备用；从-25～-20℃中取出一支分装后的冻干精浆质控品，在室温下自然解冻、混匀，将此冻干精浆质控品随着样本一起检测，根据质控品结果是否在定值范围内以判断样本结果是否在控。