[发明专利]载脂蛋白II/I及其制备方法、生物学功能及应用

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，涉及载脂蛋白II/I的结构及其获得方法、新生物学功能以及在生物医药领域中的应用。具体地说，本发明涉及载脂蛋白II/I及其活性片段的结构及其制备生产方法与功能，以及其在微生物及其相关分子模式检测诊断、促进昆虫血淋巴黑色素产生、诱导昆虫合成抗菌肽等生物医药领域中的应用，制备载脂蛋白II/I与活性片段抗体及其在生物医药领域的应用。本发明的载脂蛋白II/I的氨基酸序列如SEQ ID：2所示；编码所述载脂蛋白II/I的氨基酸序列的基因序列如SEQ ID：1所示。本发明还提供了所述天然载脂蛋白II/I、重组载脂蛋白II/I活性片段，如SEQ ID：3‑6所示。

技术领域：

本发明涉及生物医药技术领域，涉及载脂蛋白II/I的结构及其获得方法、新生物学功能以及在生物医药领域中的应用。具体地说，本发明涉及载脂蛋白II/I及其活性片段的结构及其制备生产方法与功能，以及其在微生物及其相关分子模式检测诊断、促进昆虫血淋巴黑色素产生、诱导昆虫合成抗菌肽等生物医药领域中的应用，制备载脂蛋白II/I与活性片段抗体及其在生物医药领域的应用。

背景技术：

载脂蛋白是血浆脂蛋白中的蛋白质部分，其基本功能是转运脂类物质、稳定脂蛋白结构等。载脂蛋白在人类等哺乳动物中被称为apolipoprotein(apo)，分为A、B、C、D、E五类。这些载脂蛋白亚型的异常，已经被证实与阿尔茨海默病、动脉粥样硬化等疾病相关。而在昆虫中，载脂蛋白被称为apolipophorin(apoLp)，它们构成了昆虫脂蛋白的蛋白部分。

昆虫apoLp-I及apoLp-II来源于同一个mRNA前体apoLp-II/I，并在蛋白的翻译后修饰及分泌过程中被弗林蛋白酶(Furin)切割形成。而apoLp-II/I的载脂功能并不依赖于这种切割作用。apoLp-II为N端部分、apoLp-I为C端部分，二者参与形成高密度脂蛋白(high-density lipophorin,HDLp)。昆虫载脂蛋白前体apoLp-II/I与哺乳动物apoB-48同源，两者均是脂蛋白颗粒中的重要组成部分，在脂类运输及代谢上起到不可或缺的作用。

ApoLp-II/I与其他家族成员一样，其N端包含一个较大的LLT结构域，该结构域形成一个“lipid pocket”样的结构，主要参与与脂类的结合，起到贮存或运输的作用。除了N端结构域之外，apoLp-II/I还包含一个DUF1081结构域，以及靠近C端的von Willebrandfactor module D(VWD)结构域。但这些结构域的功能目前尚无定论。

对昆虫apoLp-II/I的研究主要集中在其结构、生物合成与分泌，以及脂类转运作用等方面。但最新的研究发现，apoLp-II/I还参与了昆虫的先天性免疫反应。有报道指出，家蚕apoLp-II/I能够抑制金黄色葡萄球菌的溶血毒性。纯化后的apoLp-II/I能够降低S.aurues中与溶血素(hemolysin)相关的基因，包括hla，hlb，saeRS以及RNAIII的表达。进一步研究发现，apoLp-II/I是通过与S.aurues细胞表面的LTA结合，进而通过后者的双组份系统影响S.aurues的saePQRS操纵子，最终抑制了溶血素的表达及分泌。在冈比亚按蚊中，apoLp-II/I是全身性免疫反应的负向调控因子。RNA干扰apoLp-II/I后，按蚊的免疫应答程度显著性提高了。而这种提高作用是补体样蛋白TEP1(thioester-containing protein 1，硫酯蛋白)依赖性的，干扰apoLp-II/I能够使TEP1的表达量增高，而后者经由JNK通路产生免疫反应。上述例子表明，昆虫apoLp-II/I不仅参与了脂类的转运和代谢，同时也是一种先天性免疫相关蛋白。

目前尚未见对鳞翅目(Lepidoptera)的天(大)蚕蛾科昆虫载脂蛋白II/I的结构、制备、生物学功能及其应用的相关研究。

发明内容：

本发明所解决的技术问题是提供一系列载脂蛋白II/I及其制备方法。

所述的载脂蛋白II/I的氨基酸序列如SEQ ID：2所示；