[发明专利]一种枳的组织培养再生苗的培养方法

权利要求书

1.一种枳的组织培养再生苗的培养方法，其特征在于，选取枳的茎段作为组培用的外植体；对茎段进行愈伤组织诱导；成功诱导后通过切割愈伤组织进行进一步继代培养、增大并逐渐分化形成不定芽；再通过光下诱导不定芽再分化形成茎和叶；最后，经生根培养形成不定根后进行驯化移栽，然后正常培养；

包括以下步骤：

步骤1、外植体的选择及处理：选取枳的茎段为起始材料，消毒后作为组培用的外植体；

步骤2、愈伤组织的诱导培养：将经过消毒的外植体接种于愈伤组织诱导培养基MS+6-BA1.0-2.0mg/L+IBA0.1-0.2mg/L+GA₃0.25-0.5mg/L上进行暗培养，茎段切口处逐渐形成愈伤组织；

步骤3、愈伤组织的增殖培养：

形成的愈伤组织经切割后转接到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA0.5-1.0mg/L+IBA0.1-0.2mg/L+GA₃0.25-0.5mg/L上进行暗培养，愈伤组织较为迅速的生长膨大；

步骤4、愈伤组织的分化及再分化培养：

将增殖后的愈伤组织转移到光下培养，通过光诱导，迅速分化形成不定芽，而后缓慢分化为茎和叶；

步骤5、生根成苗及驯化移栽：

将再分化形成的茎和叶转移到生根培养基1/2MS+IBA0.25-0.5mg/L上进行培养，20～30天后，长出1-2条肉质不定根，生根成苗成为新的植株，炼苗、缓苗后正常培养。

2.根据权利要求1所述的枳的组织培养再生苗的培养方法，其特征在于，愈伤组织的诱导及增殖的培养条件均为：培养温度23-27℃，避光进行暗培养；愈伤组织分化及再分化培养、再生苗的生根培养条件均为23-27℃，光照时间为10～12h/d，光照强度为2500-3000lux。

3.根据权利要求1所述的枳的组织培养再生苗的培养方法，其特征在于，愈伤组织诱导培养基、愈伤组织增殖及分化培养基及再生苗的生根培养基均为MS培养基，蔗糖用量为20～40g/L，凝固剂为琼脂粉、用量为6～7g/L，培养基pH为5.7-5.9。

4.根据权利要求1所述的枳的组织培养再生苗的培养方法，其特征在于，所述炼苗、缓苗具体为：先在组培室打开瓶盖炼苗3天，然后将其移至温室或荫棚，再炼苗3天；然后将组培苗从培养瓶中取出，洗净其表面的琼脂，移栽到培养基质中进行缓苗，然后正常培养。

5.根据权利要求4所述的枳的组织培养再生苗的培养方法，其特征在于，所述培养基质为蛭石与珍珠盐。

6.根据权利要求4或5所述的枳的组织培养再生苗的培养方法，其特征在于，所述培养基质含水量25％以内，空气相对湿度60～80％，遮光50％。