[发明专利]一种枳的组织培养再生苗的培养方法

说明书

本发明公开了一种枳的组织培养再生苗的培养方法，选取枳的茎段作为组培用的外植体；对茎段进行愈伤组织诱导，成功诱导后通过切割愈伤组织进行进一步继代培养、增大并逐渐分化形成不定芽；再通过光下诱导不定芽再分化形成茎和叶；最后，经生根培养形成不定根后进行驯化移栽，然后正常培养。本发明枳的组织培养再生苗的方法，建立了枳的高效再生体系，该方法不受地区、季节、气候限制，可实现优质再生苗的工厂化规模化生产。

技术领域

本发明属于植物繁殖技术领域，具体地说，涉及一种枳的组织培养再生苗的培养方法。

背景技术

枳(Poncirus trifoliata(L.)Raf)是芸香科柑橘亚科枳属(Poncirus Raf.)的一种植物，为小乔木；树冠伞形或圆头形，枝有刺，花单朵或成对腋生，果近圆球形或梨形，为温带树种，喜光，稍耐荫，喜温暖湿润气候，耐寒力较强，耐热；对土壤不要求不严，多以此作柑橘类砧木，同时具有较高的药用价值和观赏价值，中国各地均有栽培。

枳虽然在中国各地均有栽培，但随着柑橘类的果树栽培面积越来越广，枳作为一种抗逆性较强，生长旺的砧木，需求量也越来越大，同时，对枳砧木的要求也越来越高。若沿用传统的分株繁殖方法，繁殖系数低，增殖速度慢，远远不能满足人们的需要；若用种子播种，存在变异变化大，难以保存亲本的优良性状等缺点；同时自然环境复杂，传统繁殖方法培育的砧木存在细菌、真菌及病毒的侵害，还会对嫁接的柑橘接穗造成一定的影响。因此，通过组织培养建立无毒再生苗的培育体系成为当前的一种趋势。

发明内容

有鉴于此，本发明针对枳的繁殖系数低、增殖速度慢及易受到细菌、真菌、病毒侵害的问题，提供了一种枳的组织培养再生苗的培养方法，建立枳的高效再生体系，可实现优质种苗的工厂化规模化生产及实验室脱毒再生苗的培养体系。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种枳的组织培养再生苗的培养方法，选取枳的茎段作为组培用的外植体；对茎段进行愈伤组织诱导；成功诱导后通过切割愈伤组织进行进一步继代培养、增大并逐渐分化形成不定芽；再通过光下诱导不定芽再分化形成茎和叶；最后，经生根培养形成不定根后进行驯化移栽，然后正常培养。

进一步地，包括以下步骤：

步骤1、外植体的选择及处理：选取枳的茎段为起始材料，消毒后作为组培用的外植体；

步骤2、愈伤组织的诱导培养：将经过消毒的外植体接种于愈伤组织诱导培养基MS+6-BA1.0-2.0mg/L+IBA0.1-0.2mg/L+GA₃0.25-0.5mg/L上进行暗培养，茎段切口处逐渐形成愈伤组织。

步骤3、愈伤组织的增殖培养：

形成的愈伤组织经切割后转接到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA0.5-1.0mg/L+IBA0.1-0.2mg/L+GA₃0.25-0.5mg/L上进行暗培养，愈伤组织较为迅速的生长膨大；

步骤4、愈伤组织的分化及再分化培养：

将增殖后的愈伤组织转移到光下培养，通过光诱导，迅速分化形成不定芽，而后缓慢分化为茎和叶；

步骤5、生根成苗及驯化移栽：

将再分化形成的茎和叶转移到生根培养基1/2MS+IBA0.25-0.5mg/L上进行培养，20～30天后，长出1-2条肉质不定根，生根成苗成为新的植株，炼苗、缓苗后正常培养。

进一步地，愈伤组织的诱导及增殖的培养条件均为：培养温度23-27℃，避光进行暗培养；愈伤组织分化及再分化培养、再生苗的生根培养条件均为23-27℃，光照时间为10～12h/d，光照强度为2500-3000lux。