[发明专利]一种快速鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法及引物对在审
| 申请号： | 201710026262.9 | 申请日： | 2017-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN107779514A | 公开（公告）日： | 2018-03-09 |
| 发明（设计）人： | 林庆胜;尹飞;冯夏;李振宇 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司44245 | 代理人： | 崔红丽,裘晖 |
| 地址： | 510640 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 鉴定 小菜 双酰胺类 杀虫剂 抗药性 方法 引物 | ||
1.一种用于快速鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的引物对，其特征在于：所述的引物对的序列：
上游引物PXRyRF：5′-TGCCATTATTCAAGCCACCCCC-3′；
下游引物PXRyRR：5′-GCAAGTCGCGTAAATCCAAAAC-3′。
2.一种用于快速鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的引物对。
3.一种快速鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)设计PCR引物，其中：
上游引物PXRyRF：5′-TGCCATTATTCAAGCCACCCCC-3′；
下游引物PXRyRR：5′-GCAAGTCGCGTAAATCCAAAAC-3′；
(2)提取待测小菜蛾样本RNA，RNA反转录成cDNA后以cDNA为模版，进行qPCR扩增；
(3)当步骤(2)中所述qPCR扩增结果RQ值≤0.5时，表明所测样品对双酰胺类杀虫剂已产生高抗药性；
步骤(3)中所述的RQ值＝2-△△Ct(田间种群)/2-△△Ct(室内敏感)。
4.根据权利要求3所述的快速鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的待测小菜蛾样本为室内敏感品系和田间种群小菜蛾3龄幼虫。
5.根据权利要求3所述的快速鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的提取待测小菜蛾样本RNA的处理方式为异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提样本RNA。
6.根据权利要求3所述的快速鉴定小菜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，其特征在于：
步骤(2)中所述qPCR扩增中的程序设定为：95℃预变性15分钟；95℃变性10秒，55.0℃退火20秒，72℃延伸20秒，40个循环；溶解曲线95.0℃15秒，65.0℃5秒，95℃5秒。
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