[发明专利]从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法

权利要求书

1.一种从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)新鲜的蛋壳清洗干净，烘干后粉碎，得到蛋壳粉，

2)将蛋壳粉和水混合并搅拌，收集下层沉淀，烘干后即得脱去蛋壳膜的蛋壳粉；

3)向步骤2)所得脱去蛋壳膜的蛋壳粉中加入中性缓冲液提取，搅拌10～30小时，收集上清液并透析，即得蛋壳蛋白粗提液；

4)将阴离子交换层析柱、阳离子交换层析柱进行串联，将步骤3)所得的上清液上柱，用平衡液洗脱1～3倍柱体积，使蛋壳蛋白质与离子交换层析柱中的填料结合；

5)将串联的阴离子交换层析柱和阳离子交换层析柱拆开，分别进行洗脱并收集洗脱峰；

6)将收集到的各洗脱峰进行透析脱盐和冷冻干燥，其中，阳离子交换层析柱的洗脱峰即为Ovocleidin-17，阴离子交换层析柱的第一个洗脱峰即为Ovocalyxin-36，第二个洗脱峰即为Ovocleidin-116。

2.根据权利要求1所述从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：所述步骤1)中，烘烤的温度为25～35℃，时间为12～24h，蛋壳粉碎粒度为50～300目。

3.根据权利要求1或2所述从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：所述步骤2)中，蛋壳粉与水的质量比为1:5～20。

4.根据权利要求1或2所述从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述中性缓冲提取液是磷酸盐缓冲液。

5.根据权利要求4所述从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：所述步骤3)中，蛋壳粉与磷酸盐缓冲液的质量比为1:5～20，磷酸盐缓冲液pH值5.5～8.5。

6.根据权利要求5所述从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：所述步骤3)中，搅拌提取时间为24～32h。

7.根据权利要求1所述从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：所述步骤4)中，平衡液为50～200mM的Tris-HCl，pH 6.8～8.8。

8.根据权利要求1所述从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：所述步骤5)中，阴离子交换层析柱的洗脱液为pH值6.2～7.8、盐浓度0.1～0.5mol/L、还原剂0.5～5mmol/L的缓冲液。

9.根据权利要求8所述从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：所述步骤5)中，阳离子交换层析的洗脱液为pH值6.8～8.8、盐浓度0.1～0.5mol/L、还原剂0.5～5mmol/L的缓冲液。

10.根据权利要求8或9所述从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：所述步骤5)中，还原剂为二硫苏糖醇或β-巯基乙醇。