[发明专利]一种稻曲病菌实验室材料的常备形态及其制备与应用方法

权利要求书

1.一种稻曲病菌实验室材料的常备形态，其特征在于，用稻曲病菌的薄壁分生孢子作日常工作的常备形态；薄壁分生孢子纯净无污染；薄壁分生孢子存放于无菌水中；薄壁分生孢子暂停生长发育，但转到培养基上能马上恢复正常生长发育。

2.如权利要求1所述的一种稻曲病菌实验室材料的常备形态的制备与应用方法，其特征在于，制备和应用方法步骤如下：

1)分生孢子的预培养：以当前实验室稻曲病菌的常备菌丝体为初始菌体，采用常规的液体振荡培养方法，培养获得含有薄壁分生孢子的培养产物；

2)分生孢子的制备培养：用三角瓶作培养器具，装盛马铃薯琼脂培养基作产孢培养基，该培养基的组分配比为：马铃薯100g、琼脂20g、水1000mL；用移液器从步骤1)获得的含有分生孢子的培养产物中，吸取少量液体，移植入三角瓶内的产孢培养基面上并涂布均匀，在合适的温度下培养，直到培养基面上形成密布的微小菌落，菌落上形成大量的新一代薄壁分生孢子；

3)稻曲病菌材料常备形态的制备：取无菌水注入步骤2)培养获得的产孢菌落上，轻轻洗脱菌落上的孢子，获得含有菌丝碎段的孢子液；用灭菌纱布过滤去除该孢子液中的菌丝碎段；将该孢子液进行离心沉淀，倒掉上清液，除去孢子液中混杂的菌体代谢产物和培养基组分；剩下的沉淀为纯净的薄壁分生孢子，以该纯净孢子作为稻曲病菌材料的常备形态；用无菌水将沉淀孢子悬浮，搅动使孢子充分分散，获得稻曲病菌材料的常备孢子液；

4)稻曲病菌材料常备形态的孢子含量标定：用无菌水将步骤3)获得的常备孢子液的孢子浓度，调配为10⁶孢子/mL；

5)稻曲病菌材料常备形态的日常存放：在无菌条件下，将步骤4)标定的常备孢子液分装到有盖密闭的灭菌容器内，并转移到25℃的暗环境中存放备用；

6)稻曲病菌材料常备形态的应用：将步骤5)存放的稻曲病菌材料常备孢子液转到超净工作台，振荡装存常备孢子液的容器，使薄壁分生孢子充分悬浮和分散；开盖后用移液器定量吸取孢子液，移植到相关的工作环节或实验程序中；吸液操作完毕后回盖密封，将剩余的常备孢子液转回步骤5)的存放处存放。