[发明专利]大豆分离蛋白‑姜黄素纳米颗粒结合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及功能性纳米生物制品，具体涉及利用谷氨酰胺酶制备大豆分离蛋白‐姜黄素纳米颗粒结合物的方法。

背景技术

近年来，国内对于利用蛋白质包埋一些疏水性生物活性成分的研究越来越多。2015年陈硕等采用pH3.0和pH7.0时的大豆分离蛋白和豌豆分离蛋白为原料，在蛋白浓度为0.5mg/mL时，向其中添加不同姜黄素浓度(0～60μM)乙醇溶液，迅速涡旋振荡20s形成蛋白质‐姜黄素复合物，经测定复合物在pH3.0和pH7.0的粒径分别为96.2nm和60.3nm，装载量分别为6.238±0.107和8.582±0.595。(陈硕,陈飞平,唐传核.植物球蛋白/姜黄素纳米复合物的制备及其对O/W型Pickering乳液氧化稳定性影响[J].现代食品科技,2015(12):197‐204.)2016年华南理工大学公开了一种可溶性大豆多糖‐大豆蛋白‐姜黄素复合物及制备与应用(专利申请号201510598337.1)。主要步骤：将大豆蛋白和大豆多糖分别分散溶解于去离子水中；将姜黄素分散于无水乙醇中充分溶解；然后将姜黄素乙醇溶液加入到大豆蛋白分散液中,得到大豆蛋白‐姜黄素混合液；再将大豆多糖分散液加入到大豆蛋白‐姜黄素混合液中,调节pH至7.0或4.0,冷冻干燥,得到可溶性大豆多糖‐大豆蛋白‐姜黄素复合物。发明人声称将大豆多糖和大豆蛋白与姜黄素进行连续复合,显著提高姜黄素在水溶液中的稳定性和缓释效果,在功能性食品及药品的开发中具有良好的应用前景。2014年华南理工大学公开了一种超声辅助制备大豆蛋白‐姜黄素复合物的方法(专利申请号201410521682.)。主要步骤：:将大豆蛋白加入水中,常温搅拌分散,水化得到大豆蛋白分散液；将所得大豆蛋白分散液进行超声处理,然后冷却至常温；将姜黄素预分散于无水乙醇中,于常温在搅拌条件下,将含有姜黄素的无水乙醇溶液添加至大豆蛋白分散液中,搅拌混合,室温静置,离心,取离心上清液干燥，得到大豆蛋白‐姜黄素复合物。发明人声称利用超声波处理展开大豆蛋白的空间立体结构,提高其与姜黄素的结合效率,大大提高了姜黄素在水中的溶解性和生物稳定性；且生产工艺简单，所需有机溶剂的量极小,绿色环保安全。2013年苏州雷纳药物研发有限公司公开了一种高包封率姜黄素白蛋白纳米药物组合物(专利申请号201210484495)。主要步骤：取处方量人血清白蛋白溶于水相,置于30℃恒温水浴,在持续搅拌(480rpm)的同时,向水相中滴加姜黄素无水乙醇溶液至处方量,加入2％戊二醛水溶液,继续搅拌固化24小时,于35℃旋转蒸发去除有机溶剂,残留水相过0.22pm微孔滤膜,冻干,即得固体粉末。发明人声称其制备的纳米药物组合物可以达到55％的包封率，同时该药物组合物可以用于临床上抗肿瘤的应用。

上述论文和专利中，未见公开利用谷氨酰胺酶改性之后制备蛋白质‐姜黄素纳米颗粒结合物的研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供大豆分离蛋白‐姜黄素纳米颗粒结合物及其制备方法，具体技术方案如下。

本发明的大豆分离蛋白‐姜黄素纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：

(1)以市售豆粕为原料，通过碱溶酸沉的方法得到自制的大豆分离蛋白；

(2)将大豆分离蛋白加入水中，充分溶解，加入谷氨酰胺酶进行酶改性，得到酶改性大豆分离蛋白；

(3)将酶改性得到的大豆分离蛋白与姜黄素乙醇溶液混合，室温搅拌充分混合，将混合液离心除去沉淀，得到的上清液进行冷冻干燥，得到的粉末即为大豆分离蛋白-姜黄素纳米颗粒结合物。

进一步地，所述碱溶酸沉的具体过程为：将豆粕以1：10-20的质量比例加入蒸馏水，用2M的氢氧化钠调节pH为7.0-9.0，之后离心取上清液，再用2M的盐酸调节pH为4-5，静置20-60min，离心得到沉淀，之后再将沉淀复溶，透析冻干，即可得到自制大豆分离蛋白。

进一步地，所述大豆分离蛋白与水的质量比为1：10-100。

进一步地，所述酶改性条件为pH为7.0-9.0，温度为30℃-60℃，保温时间为0.5-6h，反应结束之后于80-90℃水浴锅中保温10-30min，离心得到上清液，即为酶改性大豆分离蛋白。

进一步地，所述谷氨酰胺酶的添加量为大豆蛋白重量的0.01-0.4％。

进一步地，所述谷氨酰胺酶来源于解淀粉芽孢杆菌或日本田野公司。

进一步地，所述解淀粉芽孢杆菌保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC8425。

进一步地，所述姜黄素乙醇溶液浓度为0.5-5mg/mL。