[发明专利]源于牡蛎的ACE抑制肽的制备方法

权利要求书

1.源于牡蛎的ACE抑制肽的制备方法，包括用胃蛋白酶对牡蛎蛋白进行酶解的步骤，其特征在于，所述的酶解时，体系中添加枯草芽孢杆菌和乳酸菌按照任意比例组成的复合菌剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的复合菌剂的添加量为牡蛎蛋白质量的0.4～0.6％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的酶解过程是：37±2℃条件下搅拌反应8～10h，之后体系于4±2℃静置8～10h，然后再于37℃搅拌反应6～8h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的复合菌剂是枯草芽孢杆菌和乳酸菌按照质量比1:1组成的复合菌剂。

5.根据权利要求1所述的方法，包括如下步骤：

(1)以新鲜牡蛎为原料制备牡蛎蛋白；

(2)将步骤(1)所制备的牡蛎蛋白按照2g/100ml的浓度加入至0.05mol/L的磷酸缓冲液中，并加入胃蛋白酶及复合菌剂，混合均匀后于37±2℃条件下搅拌反应8～10h，之后体系于4±2℃静置8～10h，然后再于37℃搅拌反应6～8h；

(3)从步骤(2)的反应完成的体系中分离纯化牡蛎ACE抑制肽。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的步骤(1)是：将新鲜牡蛎脱壳后除去消化腺，剩余部分低温状态下绞碎后，加入到等体积的PBS缓冲液中，充分搅拌；混合物于4℃静置6小时后，离心取上清液，按照75wt％加入硫酸铵，再次在4℃条件下静置6小时，离心；然后将沉淀物与等体积水分散，装入透析袋，流水透析24小时，再用去离子水透析24小时，然后将内容物低压冷冻干燥，得到牡蛎蛋白。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的步骤(3)是：步骤(2)的反应产物首先用Sephadex LH-20凝胶层析柱分离，流动相为30％的甲醇溶液，流速为0.5mL/min，上样体积为10mL，样品浓度为0.2g/mL，检测波长为280nm；台式纪录仪记录速度为0.2mm/min，电压10mv，电流2安培；以20min/管的速度收集25～30管组分；

采用RP-HPLC Hypersil BDS C₁₈对产物进一步分离，上样体积20μl，上样浓度10mg/mL，流速1mL/min；

梯度洗脱：流动相A液：0.1％的TFA水溶液；流动相B液：乙腈；

0min：A，100％；B 0％；

40min：A，0％；B，100％；

50min：A，0％；B，100％；

检测波长为215nm；收集信号组分，监测并采集ACE抑制活性组分。