[发明专利]生产无岩藻糖单克隆抗体的CHO细胞系建立及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种生产无岩藻糖单克隆抗体的CHO细胞系建立及其应用。

背景技术

抗体最初用于疾病治疗可追溯至一个世纪之前，不过其飞速发展主要是在近30年的时间。1975年Koehler and Milstein创立了体外杂交瘤技术，得到了鼠源性的单克隆抗体，开始了多克隆抗体走向单克隆抗体的新时代(王志明，高健和李耿，治疗性单克隆抗体药物的现状及发展趋势.中国生物工程杂志，2013(06)：p.117-124)。单克隆抗体具有特异性高，效价高，纯度高，重复性强，成本低并可大量生产等优点，但鼠源性单抗应用于人类具有较强的免疫原性，因此限制了其临床应用。随着现代生物技术的飞速发展，及对抗体分子结构和基因结构的深入了解，抗体药物的发展进入了基因工程抗体阶段。经过鼠源性抗体、嵌合抗体、人源化抗体及人源性抗体的发展，单克隆抗体作为治疗性药物真正成为可能。近年来，各种基因工程抗体的成功制备和应用，以及抗体生产水平的显著提高使抗体药物的研发进入了一个快速发展的新阶段。目前市场上已有30多种治疗性抗体，主要用于肿瘤、自身免疫病、慢性炎症反应、病毒感染及器官移植排斥的治疗(Elvin，J.G.，R.G.Couston，and C.F.van der Walle，Therapeutic antibodies：Market considerations，disease targets and bioprocessing.International Journal of Pharmaceutics，2013.440(1)：p.83-98.)。在2015年全球药品销售TOP10排行榜中，生物药占有6种，其全球销售总额已超过450亿美元。治疗性抗体已成为目前制药行业增长最快，盈利最大的产品之一。

目前在工业上提高抗体的产量主要通过两个方面：一是通过改进工艺参数提高抗体的表达量；二是对抗体结构优化，提高抗体效价。治疗性抗体多数为糖蛋白，最近研究表明粘连在蛋白质上的不同糖链不仅参与器官的形成、老化、感染、癌化、癌转移等多种生命现象，而且可以对抗体的效能产生很大影响(Jefferis，R.，Recombinant antibody therapeutics：the impact of glycosylation on mechanisms of action.Trends in Pharmacological Sciences，2009.30(7)：p.356-362.)。

治疗性抗体发挥作用的方式有几种，最主要的是通过抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)和补体依赖的细胞毒性作用(CDC)(Iannello，A.and A.Ahmad，Role of antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in the efficacy of therapeutic anti-cancer monoclonal antibodies.Cancer and Metastasis Reviews，2005.24(4)：p.487-499.)。ADCC作用是表达抗体Fc受体(FcγRIIIa)的自然杀伤细胞(NK细胞)通过与已结合在靶细胞(病毒感染细胞、癌细胞)表面的IgG抗体的Fc片段结合，从而达到杀伤靶细胞的作用。已有研究表明在IgG抗体的Fc片段CH2结构域Asn297部位的糖链结构去除岩藻糖时，可以增强NK细胞的FcγRIIIa与IgG抗体的Fc片段之间的结合力，从而增强抗体的ADCC效应(Shinkawa，T.，et al.，The absence of fucose but not the presence of galactose or bisecting N-acetylglucosamine of human IgG1 complex-type oligosaccharides shows the critical role of enhancing antibody-dependent cellular cytotoxicity.J BiolChem，2003.278(5)：p.3466-73.)。