[发明专利]原多甲藻的培养基与培养方法

权利要求书

1.一种原多甲藻培养基，其特征在于，包括下列重量的组分：

NH₄NO₃，20-100mg；CO(NH₂)₂，20-60mg；KH₂PO₄，1-10mg；碳酸氢盐，100-800mg；MnCl₂·4H₂O，15-50g； FeC₆H₅O₇·5H₂O，10-30mg；VB12，1×10^-5-1×10^-3mg；VB1，50-200mg；KCl，0.5-5mg；Na₂EDTA 10-15g；分子量1500-2000Da的壳寡糖0.2-5g，海水1000mL。

2.根据权利要求1所述的原多甲藻培养基，其特征在于，包括下列重量的组分：

NH₄NO₃，30mg；CO(NH₂)₂，40mg；KH₂PO₄，5mg；碳酸氢盐，500mg； MnCl₂·4H₂O 26g、FeC₆H₅O₇·5H₂O 20mg；VB12，1×10^-4mg；VB1，100mg；KCl，3mg；Na₂EDTA 12.4g，分子量1500-2000Da的壳寡糖1g，海水1000mL。

3.根据权利要求1或2所述的原多甲藻培养基，其特征在于，所述的碳酸氢盐选自碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳酸氢铵中的一种或多种的组合。

4.权利要求1所述的原多甲藻培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1) 将所述培养基配方中的海水灭菌待用；

2)将所述培养基配方中剩余的组分按照顺序和剂量依次加入到步骤1)灭菌的海水中，加入后再充分搅5分钟，即可接种使用。

5.产毒原多甲藻的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一阶段：三角烧瓶培养；海水为经0.45μm纤维膜过滤后高温灭菌的海水，盐度为30-35；添加权利要求1所述的培养基组分后，调节pH为7.9±0.3；室内培养，空调控温，20±3℃；日光灯管照明，光强 5000-7000lux，光暗比12h：12h；

用 3000-5000mL 三角烧瓶培养，工作体积占瓶体积的 3/5，取对数生长期藻种接种；接种密度 2×10⁴cell/mL-5×10⁴cell/mL ；每天摇瓶6次；藻细胞密度达2×10⁵cell/mL-3×10⁵cell/mL，转入下一阶段培养；

第二阶段：矿泉水桶培养；使用18L矿泉水桶培养，用次氯酸钠消毒海水的方法消毒矿泉水桶；消毒方法为每立方米海水中加入含有效氯 20 毫克/千克的次氯酸钠，将添加次氯酸钠后的灭菌海水加入矿泉水桶中，充气 30分钟，停气，经 3-5 小时消毒后，用灭菌后的海水润洗3遍，测定无余氯存在即可使用；

海水为经0.45μm纤维膜过滤后灭菌的海水，盐度为30-35，添加8L培养基组分后，瓶口用灭菌封口膜封口；导入气石充含5%二氧化碳的压缩空气保持pH为7.9±0.3，室内培养，空调控温20±3℃，双侧连续光照6000±1000LUX，光照时间15h:9h；接种密度 2×10³cell/mL-3×10³cell/mL；每隔三天添加5L培养液，培养7-9天，藻液呈棕黄色，收集5L左右培养液；并继续每隔三天添加5L培养液，保持密封，即可循环培养，不断收集。