[发明专利]一种用于检测传单患者EB病毒FISH检测探针

权利要求书

1.一种用于检测传染性单核细胞增多症患者EB病毒FISH检测探针，其特征在于，所述探针为EB病毒BamHI-W片段经过标记得到；

所述BamHI-W片段的核苷酸序列为EBV基因组13232-16189所示。

2.根据权利要求1所述的FISH检测探针，其特征在于，所述标记采用Biotin-dUTP标记。

3.一种用于检测传染性单核细胞增多症患者EB病毒FISH检测探针的制备方法，其特征在于，包括：

培养EB病毒并提取EB病毒DNA作为模板，PCR扩增EB病毒BamHI-W片段，对所述BamHI-W片段进行标记得到标记产物；纯化所述标记产物后得到EB病毒FISH检测探针。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，培养EB病毒所用的宿主细胞为P3hr-1细胞。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，扩增EB病毒BamHI-W片段所用的上游引物核苷酸序列为：

5’-CTTCTCTCTGTCCCCCTGCTCCTCT-3’；

下游引物核苷酸序列为：

5’-CTAGGGTCCCTTCTGGGGGACATCCT-3’。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在所述扩增的反应程序中，Tm值为53～57℃，反应循环次数为30～34次。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，对所述BamHI-W片段进行标记的方法包括：

1)、将BamHI-W片段DNA加入水中98～100℃变性7～13分钟；

2)、按照1g BamHI-W片段DNA：3.5～4.5μL Biotin-High prime的比例加入所述Biotin-High prime，瞬时离心，36～38℃水浴8～16h；

3)、63～67℃加热8～12分钟终止标记得到标记产物。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，纯化所述标记产物的操作包括：

a)、按体积份数计，将17～23份标记产物、8～12份7.5M的醋酸铵、0.6～1.4份鱼精DNA、70～110份冰冷的无水乙醇混合并于-75～85℃沉淀60～70min；

b)、0～6℃，11000～13000rpm离心15～25min后弃上清；

c)、加入73～77％乙醇洗涤1～2次，0～6℃，11000～13000rpm离心15～25min；

d)、弃上清，风干沉淀，用FISH杂交液重悬。

9.一种用于检测传染性单核细胞增多症患者EB病毒的试剂盒，其包含权利要求1或2所述的FISH探针。

10.权利要求1或2所述的FISH探针在制备检测传染性单核细胞增多症患者EB病毒的试剂或试剂盒中的应用。