[发明专利]一种用于检测传单患者EB病毒FISH检测探针

说明书

技术领域

本发明涉及医学诊断技术领域，具体而言，涉及一种用于检测传单患者EB病毒FISH检测探针及其制备方法。

背景技术

自从1964年Epstein和Barr等在淋巴瘤细胞系中发现了EB病毒颗粒以来，人们对EBV的认识进入了崭新的阶段。EBV与人类多种感染性疾病如传染性单核细胞增多症、慢性活动性EBV感染、EBV相关的噬血细胞增多综合征、移植后淋巴组织增生症及淋巴瘤、鼻咽癌及胃癌等多种恶性肿瘤密切相关。

传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)是一种急性全身淋巴细胞增生性疾病，常在儿童期或青春期初期感染较大量的EBV时发病，主要由飞沫与唾液经呼吸道传播，其次通过密切接触传播，潜伏期约40天。IM的典型特征包括不规则发热，咽喉炎，淋巴结肿大，全身乏力，以及外周血非典型淋巴细胞增多。脾肝肿大，黄疸和脾破裂等并发症十分罕见。其病程通常持续数天至数周，临床常认为其呈自限性。有文献称，近年来EBV感染儿童逐年增多，夏秋较冬春季节常见，且半数儿童感染EBV后表现为IM，且临床表现趋于多样化。一般情况下IM以抗病毒及对症支持治疗为主，预后较好。

但少数IM患儿临床表现呈爆发性过程，出现严重并发症，累及全身多个系统并造成多脏器损害，临床称为重症IM(severe infectiousmononucleosis,SIM)或致死性IM(fatal infectious mononucleosis，FIM)，其中约80％FIM可进一步进展为EBV-AHS。然而目前国内对于重症IM并没有统一认识及诊断标准，临床上主要依据患者症状轻重以及并发症来判断其病情轻重程度，以便与普通IM区分。有研究认为IM患者有2个系统以上受损即可诊断为重症IM，曾有学者进行过统计分析发现重症IM如不及时治疗死亡率高达92.3％。所以如何及时并且准确诊断SIM，对于病人的治疗及预后十分关键。

因EBV的分离相对困难，所以临床一般采用血清学方法作辅助诊断。但当机体免疫低下时，则很难用血清学结果分析，所以在EBV感染中应用分子诊断学方法十分必要。目前常见EBV的临床检测项目有外周血涂片进行异型淋巴细胞计数、嗜异性凝集试验、EBV抗体检测(包括EBV-VCA-IgM，EBV-VCA-IgG)、PCR检测EBV-DNA。

外周血涂片异淋计数以及嗜异性凝集试验均为非特异性试验。多数IM患者异淋计数超过10％，但除EBV外的其他病毒如巨细胞病毒(cytomegalovirus)、登革病毒(Dengue virus)等，或某些药物感染也可引起同样反应。嗜异性凝集试验在起病后1-2周可出现阳性，3-4周达到高峰，阳性率据称80％以上，但是少数病例该实验结果始终阴性。另外感染过程的早期常出现嗜异性凝集试验假阴性。

EBV-VCA-IgM是IM急性期重要的诊断指标，出现在EBV感染早期，通常在4-6周消失，所以此项指标与病人入院时间有密切关系，加之实验结果也常受到实验人员操作方式、诊断试剂盒检出率的影响，常常不能准确反应病人情况。EBV-VCA-IgG出现在EBV感染的急性期，发病后2-4周达到高峰，略微下降后持续终生，所以这一指标目前多用于流行病学统计。

临床上常用且较为可靠的指标仅有PCR检测EBV-DNA结果。PCR是20世纪80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术，由Mullis首次报道，通过体外扩增可以将目的基因片段百万倍地放大，从而极大地提高核酸分子检测的灵敏度。PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好、简便快速、易自动化以及产率高等优点。但正由于PCR使DNA拷贝数呈指数增长，所以极微量的模板污染就可以造成假阳性出现。其次在标本采集、运输及处理过程中也易发生污染。另假阴性也是其反应过程中易出现的一个不可忽视的问题，这类问题大多数与标本处理、PCR试剂过期或PCR仪器故障有关。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测传染性单核细胞增多症患者EB病毒FISH检测探针，以解决上述问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种用于检测传染性单核细胞增多症患者EB病毒FISH检测探针，所述探针为EB病毒BamHI-W片段经过标记得到；

所述BamHI-W片段的核苷酸序列为EBV基因组13232-16189所示。