[发明专利]一种细胞穿膜肽及其制备方法、应用

权利要求书

1.一种细胞穿膜肽，其特征在于：所述细胞穿膜肽为如下的序列：CH_m-X-H_nC；其中，所述C为半胱氨酸残基，所述H为组氨酸残基；所述X为a个赖氨酸残基，b个精氨酸残基，或者由c个赖氨酸残基与d个精氨酸残基组成；且3≤m≤5，3≤n≤5，6≤a≤9，6≤b≤9，6≤c+d≤9。

2.如权利要求1所述的细胞穿膜肽的制备方法，其特征在于：所述方法包括：

1)提供一树脂，将所述树脂在第一溶剂中浸泡至树脂溶胀；所述树脂选自Fmoc-Wang树脂和H-Cys(Trt)-2cl树脂；所述第一溶剂包括二氯甲烷；

2)将氨基酸、缩合剂溶于第二溶剂，形成混合物；所述第二溶剂选自二甲基甲酰胺、二氯甲烷及四氢呋喃；所述氨基酸与树脂的投料摩尔量比例为1-10；所述缩合剂与树脂的投料摩尔量比例为1-10；

3)将所述混合物加入所述溶胀的树脂中形成反应体系，反应1-4h；

4)去除反应后反应体系中的溶液，洗涤，气体鼓动，抽干；

5)在经由步骤4)后的反应体系中加入脱帽液，气体鼓动，抽干；

6)去除经由步骤5)后的反应体系中的溶液，洗涤，气体鼓动，抽干；获得合成的多肽链；

7)在所述多肽链中加入切割液，在4-30℃下搅拌1-4h，过滤得滤液，洗涤所述滤液；

8)将所述滤液萃取，离心得到多肽粗品。

3.根据权利要求2所述的细胞穿膜肽的制备方法，其特征在于：所述缩合剂选自碳二亚型缩合剂和苯并三唑鎓盐型缩合剂。

4.根据权利要求2所述的细胞穿膜肽的制备方法，其特征在于：所述氨基酸选自半胱氨酸、组氨酸、赖氨酸以及精氨酸。

5.根据权利要求2所述的细胞穿膜肽的制备方法，其特征在于：所述步骤8)中，所述萃取包括：在所述滤液中，加入无水乙醚，放置1-4h；所述无水乙醚与滤液的体积比为5-60。

6.如权利要求1所述的细胞穿膜肽在制备护肤品的应用，其特征在于：所述细胞穿膜肽在C端或N端共价或非共价连接载物分子，并携带载物分子穿过细胞膜进入细胞。

7.如权利要求1所述的细胞穿膜肽在制备药物、转染试剂或诊断试剂中的应用，其特征在于：所述细胞穿膜肽在C端或N端共价或非共价连接标记物或载物分子，并携带标记物或载物分子穿过细胞膜进入细胞。

8.根据权利要求7所述的细胞穿膜肽在制备药物、转染试剂或诊断试剂中的应用，其特征在于：所述标记物选自荧光素、生物素以及亲和基团；所述载物分子选自糖类、多肽、药物分子前体、纳米粒子。

9.根据权利要求7所述的细胞穿膜肽在制备药物、转染试剂或诊断试剂中的应用，其特征在于：所述细胞穿膜肽与质粒DNA结合以用于介导质粒DNA。

10.根据权利要求9所述的细胞穿膜肽在制备药物、转染试剂或诊断试剂中的应用，其特征在于：所述细胞穿膜肽与质粒DNA结合，包括如下步骤：

(1)将质粒DNA与所述细胞穿膜肽各自混合于磷酸盐缓冲液中；

(2)调整所述质粒DNA与穿膜肽含量间的N/P比为0-80；

(3)培养过夜的细胞，用无血清的培养基洗涤，将含有所述质粒DNA和细胞穿膜肽的磷酸盐缓冲液加入到培养基中；

(4)4-6h后去掉培养基，添加含有10-15％FCS的培养基，静置1-4h。