[发明专利]一种细胞穿膜肽及其制备方法、应用

说明书

本发明提供了一种细胞穿膜肽及其制备方法、应用，所述细胞穿膜肽具有如下的序列：CH_m‑X‑H_nC；其中，所述C选自半胱氨酸残基，所述H选自组氨酸残基；所述X选自a个赖氨酸(K)残基、b个精氨酸(R)残基或者c个赖氨酸(K)残基和d个精氨酸(R)残基；且3≤m≤5，3≤n≤5，6≤a≤9，6≤b≤9，6≤c+d≤9。所述细胞穿膜肽的穿膜效果显著，效率高，且低毒安全。

技术领域

本发明属于生物医学领域，尤其涉及一种细胞穿膜肽及其制备方法、应用。

背景技术

细胞膜由脂质双分子层组成，其内部由疏水性的非极性分子构成。细胞膜是物质进出细胞的屏障，其仅仅允许分子量小于600Da的非脂溶性分子进入活细胞。这一屏障虽然对机体有保护作用，但也使一些有价值的亲水性大分子药物难以穿透细胞膜进入细胞内部达到有效治疗浓度，使得这类有治疗价值但无细胞穿透性且易降解的亲水性分子在细胞生物学、药学等研究领域中的应用大大受到限制。虽然多年来，研究人员致力于将这些效应分子导入活细胞的有效方法，虽各有优势，但都不可避免的存在一些问题。

近年来，多肽作为药物辅助功能的应用逐渐成为了药物研制的热点之一。细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides，CPPs)，也称蛋白转导域(protein transductiondomains，PTDs)，是一类具有细胞穿透功能的多肽的总称，它具有很强的跨膜转运能力，能够携带比其相对分子量大1000倍的外源性大分子进入细胞。CPPs可以有效地将蛋白、多肽、核酸片段通过无受体介导、无耗能的方式，导入多种哺乳动物细胞，且在一定范围浓度内不会造成细胞损伤。这一重要发现为具有治疗效应的生物大分子提供了一个有效的载体，在细胞生物学、基因治疗、药物体内转运、临床药效评价及细胞免疫学等研究领域均具有良好的应用前景。

现阶段，研究及应用最多的CPPs是来源于人免疫缺陷病毒(HIV-1)的转录活性因子(Trans-activating transcriptional activator Tat)。目前虽已证实Tat可穿透细胞膜进入细胞内，但其穿膜效率并不理想，不能有效的携带物质转运入细胞内部。

发明内容

针对现有技术中的上述缺陷，本发明的主要目的在于提供一种细胞穿膜肽及其制备方法、应用，所述细胞穿膜肽的穿膜效果显著，效率高。

为了解决上述缺陷，本发明采用如下技术方案：一种细胞穿膜肽，所述细胞穿膜肽具有如下的序列：CH_m-X-H_nC；

其中，所述C选自半胱氨酸残基，所述H选自组氨酸残基；所述X选自a个赖氨酸(K)残基、b个精氨酸(R)残基或者c个赖氨酸(K)残基和d个精氨酸(R)残基；且3≤m≤5，3≤n≤5，6≤a≤9，6≤b≤9，6≤c+d≤9。

作为进一步的优选，所述细胞穿膜肽序列两端的组氨酸残基的数目相同。

一种细胞穿膜肽的制备方法，所述方法包括：

1)提供一树脂，将所述树脂在第一溶剂中浸泡至树脂溶胀；

2)将氨基酸、缩合剂溶于第二溶剂，形成混合物；

3)将所述混合物加入所述溶胀的树脂中形成反应体系，反应1-4h；

4)去除反应后反应体系中的溶液，洗涤，气体鼓动，抽干；

5)在经由步骤4)后的反应体系中加入脱帽液，气体鼓动，抽干；

6)去除经由步骤5)后的反应体系中的溶液，洗涤，气体鼓动，抽干；获得合成的多肽链；

7)在所述多肽链中加入切割液，在4-30℃下搅拌1-4h，过滤得滤液，洗涤所述滤液；

8)将所述滤液萃取，离心得到多肽粗品。