[发明专利]一个聚合常用筛查靶标的转基因油菜SD-rapeseed及其应用

说明书

本发明公开了一个聚合常用筛查靶标的转基因油菜SD‑rapeseed及其应用，涉及包括遗传转化及转基因检测在内的生物技术领域。在本发明中，通过农杆菌介导法将常用的11个转基因筛查元件导入到常规油菜品种中双6号中，获得转基因筛查油菜SD‑rapeseed。插入11个转基因筛查元件的融合序列如SEQ NO.1。以转基因油菜SD‑rapeseed作为原材料可以制备转基因油菜筛查检测通用基体标准物质及基因组DNA标准物质。本发明适用于转基因油菜筛查检测及筛查检测标准物质的制备，克服了制备质粒标准物质容易污染环境的缺陷。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一个聚合常用筛查靶标的转基因油菜SD-rapeseed及其应用，具体地说，是通过遗传转化获得的聚合11个常用筛查靶标的转基因油菜及其在转基因标准物质制备和转基因检测中的应用。

背景技术

自转基因作物大规模商业化以来，转基因生物的安全性问题一直备受社会各界关注，为此，包括中国、欧盟、日本和韩国等在内的50多个国家和地区纷纷颁布实施转基因生物安全管理法律法规；为了保护消费者的知情权，对转基因产品纷纷实施标识制度，并规定了标识阈值。

转基因标识制度的实施需要开发建立转基因检测方法，根据检测特异性的不同，目前的检测方法可分为筛查检测方法、构建特异性检测方法和转化事件特异性检测方法。其中，筛查检测方法检测的靶标是转基因作物中最常见的通用元件，如CaMV35启动子、NOS终止子等。因此，筛查检测是转基因检测的第一步，检测机构通常根据筛查检测的结果，初步判定样品中是否含有转基因成分。

任何检测工作的开展、检测结果的质量控制和溯源都离不开标准物质。无论是目前在研的标准物质还是在售的标准物质，绝大部分都是基于转化事件特异性检测的需要研制的，没有满足转基因筛查检测需求的标准物质。在转基因筛查检测中，由于缺乏标准物质，只能利用混合的转化事件特异性检测用标准物质作为参照标准。但利用转化事件特异性检测用标准物质的混合物进行转基因筛查存在多种问题：1)基因工程研究常用的潮霉素抗性基因HPT等转基因元件没有相应的标准物质；2)部分筛查元件在不同的转化事件中重复出现，导致阳性对照不同元件拷贝数不一致，难以准确反映检测的灵敏度；3)不同转基因成分DNA提取效率存在差异，造成检测灵敏度判断的误差。如果不用混合的转基因材料作为阳性对照，需要根据检测的靶标设置多个阳性对照，增大了提取DNA的工作量，而且为了考察DNA质量，还要多设置内标准基因的反应，进一步提高了检测成本，增大了检测的工作量，为检测工作造成不便。

虽然用聚合检测靶标的质粒作为标准物质可以解决缺乏通用筛查标准物质缺乏的难题，但质粒标准物质存在着容易污染检测环境的问题。结合上述考虑，以解决缺乏转基因筛查检测用标准物质这一难题为切入点，将常用的转基因筛查元件转化到油菜中，创制转基因油菜筛查检测标准物质候选物，研制转基因油菜筛查检测基体标准物质或基因组DNA标准物质。与质粒标准物质相比，基因标准物质或基因组DNA标准物质没有易于污染环境的缺陷。

经对现有专利和其他文献的检索，尚未发现任何关于转基因油菜筛查检测通用标准物质研制和应用的报道。

发明内容

本发明的目的就在于提供一个聚合常用筛查靶标的转基因油菜SD-rapeseed及其应用。

本发明的目的是这样实现的：

通过将常用的筛查元件聚合插入到常规油菜中，创制一种携带常用筛查元件的转基因油菜；以转基因油菜为候选物制备转基因油菜筛查检测通用标准物质，通过研制转基因油菜筛查检测通用标准物质解决我国转基因油菜筛查检测中缺乏标准物质的难题。

一、获得聚合常用筛查靶标的单拷贝转基因油菜SD-rapeseed的方法