[发明专利]一种检测AQP‑4自身抗体的芯片、制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药与生物检测技术领域，具体涉及一种检测AQP-4自身抗体的芯片、制备方法及其应用。

背景技术

AQP(aquaporins)家族是近几年来逐渐被发现并认识的一类与水通透有关的膜转运蛋白，广泛分布于机体多处涉及水分子快速跨膜转运的部位，在维持体内水、电解质运输平衡中发挥着重要作用。目前，在哺乳动物组织中已发现13种水通道蛋白(AQP0-AQP12)。其中，AQP-4主要分布于肺、脑、眼等组织内，是脑和眼内分布最多、最广泛的水通道蛋白之一，兼有水运输平衡及渗透压感受器的双重功能，在脑和视网膜内水、电解质运输平衡以及眼内压恒定的调节等方面发挥着重要作用。

多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS)和视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)是中枢神经系统最为常见的脱髓鞘疾病，视神经脊髓炎病人血清中存在着一种特异性自身抗体NMO-IgG，在NMO、MS、视神经炎(Optic neuritis，ON)、长节段横贯性脊髓炎(Longitudinally extensive tranverse myelitis，LETM)患者的血清中阳性率较高，NMO患者尸检的病理显示病灶中血管周围有大量的免疫球蛋白和补体沉积、星型胶质细胞破坏和再生，其分布与AQP-4表达的分布相一致，目前的诊断标准也将NMO-IgG抗体(即为AQP-4自身抗体)阳性做为诊断视神经脊髓炎和视神经脊髓炎谱系疾病的的重要标志物，且AQP-4自身抗体的检测对于视神经脊髓炎的诊断价值已经被大量临床和基础研究所证实。

目前，检测AQP-4自身抗体的主要技术有间接免疫荧光法(Indirect Immunofluorescence，IIF)、荧光免疫沉淀法(Fluoroimmunoprecipitation Assay，FIPA)、放射免疫沉淀法(Radioimmunoprecipitation Assay,RIPA)、荧光免疫细胞染色法(Cell-Based Assay，CBA)及酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)。其中以CBA和FIPA的敏感性和特异性最为理想，因此被广泛认可。然而，CBA法应用的质粒为EGFP标记的人AQP4cDNA质粒及对照EGFP cDNA质粒，应用聚乙烯亚胺(PEI)或脂质体方法进行瞬时转染，平均检测周期超过两天，耗时长，人力物力损耗大，荧光效率不稳定，人为观察也费时费力，而且过表达的AQP-4一方面空间构型不能保证与天然状态相同，另一方面表达水平不稳定，这两个因素容易造成假阳性检测结果；FIPA法涉及到同位素的应用，环境危害性大大增加。此外，针对AQP-4自身抗体的检测国内目前只少数研究者利用CBA和FIPA做了科研研究，尚未常规应用于临床。

综上可见，研究开发高效、敏感、准确的AQP-4自身抗体的检测方法及产品是科学研究及临床检测领域中亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测AQP-4自身抗体的芯片、制备方法及其应用，用以解决现有AQP-4自身抗体检测耗时耗力、成本高、检测结果不准确的问题。

为实现上述目的，首先，本发明提供一种用于AQP-4基因沉默的RNAi序列，所述RNAi序列包括如下序列中的至少一对：

stealth_121 GAGAGAACATCATGGTGGCTTTCAA

stealth_control_121 GAGACAATACTGTGGTTCGTGACAA

stealth_149 GGTCTGGACTCAAGCTTTCTGGAAA

stealth_control_149 GGTGGCACTAACGTTCTGTGTCAAA

stealth_595 GCTGTGATTCCAAACGGACTGATGT

stealth_control_595 GCTAGTTCCAACAGGCAGTATGTGT

stealth_710 CCGATCCTTTGGACCTGCAGTTATC

stealth_control_710 CCGTCCGTTCAGGTCGACTTATATC。

技术方案二，本发明还提供一种AQP-4基因沉默的星状胶质细胞，所述星状胶质细胞借助上述RNAi序列进行AQP-4基因沉默，AQP-4的蛋白敲除效率不低于65％。