[发明专利]一种病毒RNA的提取试剂盒和提取方法

说明书

本发明提供了一种病毒RNA的提取试剂盒，包括裂解结合液A、洗涤液B、洗脱液C和消解液D，裂解结合液A含有20～50mM蔗糖，20～50mM硫酸铵，10～50mM Tris‑HCl，1～5% （V/V）Brij‑58，0.2～0.5mg/mL磁珠；pH值为4.5～5.5，洗涤液B含有1～5%（V/V） Brij‑58，5～25mM Tris‑HCl，0.5～1mg/mL蛋白酶K，pH值为6～7；利用该试剂盒进行RNA的提取，该方法不依赖传统的Chaotropic盐，在低盐离子环境下即可裂解、吸附和洗涤RNA，同时洗涤液中不含醇类物质，即可去除相关的盐分和杂质。本发明的方法简单可行，成本低廉，具有更实际的应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，更具体地，涉及一种病毒RNA的提取试剂盒和提取方法。

背景技术

核酸提取是核酸检测整个技术流程的第一步，也是分子生物学中最关键的方法之一。它是下游核酸检测和科学研究的基础，抽提的核酸的质量及其完整性会直接影响临床研究或诊断的结果。一般的核酸提取过程包括两大步骤：样品的裂解和纯化。裂解指使样品中的核酸释放到反应体系中，纯化则是指使核酸与反应体系中的其它成分，如蛋白质、盐类以及其他杂质彻底地分离。常用的RNA的提取方法有TRIZOL法、异硫氰酸胍法、CTAB-LiCl法及国内外各生物公司的总RNA提取试剂盒等。RNA提取的经典方法是TRIZOL法，它是一种基于异硫氰酸肌/苯酚/氯仿抽提原理的方法，该法适用范围广，动植物都适用，提取的RNA基本无基因组DNA的污染，但是该法操作步骤繁琐，提取试剂中使用了苯酚、氯仿等有毒试剂，而且该法不适用于富含多糖多酚材料 RNA的提取。CTAB-LiCl法常被用来提取植物组织RNA，但是由于CTAB本身是一个与SDS功能相类似的试剂，尽管它可和RNA以及DNA形成不溶的复合物，但CTAB法通常要结合其它操作，如再经LiCl沉淀等步骤，使得该法操作繁琐，并且在抽提时使用有毒试剂氯仿。传统的提取试剂,由于提取得率相对较低，且步骤较为繁杂，给提取工作带来一定影响，因此难以得到合格的RNA样品。

磁珠法是近几年才发展起来的核酸提取方法。磁珠的直径为几十纳米至数微米，在磁场下表现出磁性，由无机/有机或者无机/无机材料组成的外形呈现为球状的复合粒子。磁珠法提取核酸不需要苯酚和氯仿等毒性大的有机溶剂，提取的核酸纯度高、产量大。专利号为201010281633.6、201510023368.4等公开了提取病毒DNA或RNA的方法，但这些方法都是基于Chaotropic盐（盐酸胍、异硫氰酸胍、高氯酸钠等）下裂解和吸附DNA或RNA，接着用一定比例的乙醇进行洗涤，最后再将核酸释放到洗脱液中。其中Chaotropic盐是一种破坏分子力（氢键）稳定性的一种盐，它可使疏水性的蛋白质更易溶于水，不能在低盐干扰分子间的由非共价键（力）形成的相互作用，在Chaotropic盐中磁珠吸附核酸的能力会有所增强，目前国内已公开的专利中提取RNA基本上都是在此基础上衍生出来的。现有技术很少有不基于Chaotropic盐的提取RNA的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种病毒RNA的提取试剂盒。

本发明的第二个目的是提供一种利用上述RNA提取试剂盒对病毒RNA进行核酸提取的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

一种病毒RNA的提取试剂盒，包括裂解结合液A、洗涤液B、洗脱液C和消解液D，所述裂解结合液A含有20～50mM蔗糖，20～50mM硫酸铵，10～50mM Tris-HCl，1～5% （V/V）Brij-58，0.2～0.5mg/mL磁珠；pH值为4.5～5.5，所述洗涤液B含有1～5% （V/V）Brij-58，5～25mMTris-HCl，0.5～1mg/mL蛋白酶K，pH值为6～7。